Bioanalytical assessment of Cetuximab in Wistar rat plasma using nSMOL and LCMS-8060

Význam tématu

Bioanalytické stanovení monoklonálních protilátek je nezbytné pro monitorování terapeutické expozice, zajištění kvality léčby a dodržování farmakokinetických profilů. Metoda nSMOL ve spojení s LC-MS/MS poskytuje vyšší specifičnost a rychlost analýzy ve srovnání s tradičními imunotesty.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této studie bylo vyvinout a validovat bioanalytickou metodu pro kvantifikaci Cetuximabu v plazmě potkana Wistar pomocí technologie nSMOL a LCMS-8060. Práce zahrnuje výběr signature peptidu, optimalizaci MRM a vyhodnocení linearity, přesnosti a citlivosti metody.

Použitá metodika

Metoda nSMOL využívá selektivní proteolýzu Fab fragmentu mAb procesem omezovaným velikostí nanokuliček trypsinu (200 nm) a pórovým polymerem (100 nm). Po imobilizaci a štěpení se získané peptidy očistí a analyzují v LC-MS/MS.
Pro selekci signature peptidu byla použita sekvenční zarovnání v softwaru Skyline a optimalizace detekčních přechodů MRM. Kalibrační křivka byla připravena v rozsahu 0.295–150 µg/mL, QC vzorky pro validaci měly koncentrace 0.295 a 0.59 µg/mL.

Použitá instrumentace

• Shimadzu LCMS-8060, triple kvadrupólový hmotnostní spektrometr
• nSMOL Antibody BA kit od Shimadzu
• Softwarový balík LabSolutions včetně modulu Skyline pro optimalizaci MRM

Hlavní výsledky a diskuse

Analýzy prokázaly dobrou linearitu křivky s korelačním koeficientem R² 0.9900 v rozsahu 0.295–150 µg/mL. Mez stanovení (LLOQ) byl 0.295 µg/mL a horní mez (ULOQ) 150 µg/mL. Přesnost a opakovatelnost všech QC a kalibračních vzorků splňovala požadavky validačních směrnic (přesnost 80–117 %). Výsledky MRM chromatogramů potvrdily specifickou a robustní detekci signature peptidu GPSVFPLAPSSK v matrici potkaní plazmy.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená selektivita a citlivost při kvantifikaci mAb v biologických matricích
• Zkrácení doby vývoje metodiky díky standardizovaným protokolům nSMOL
• Široký dynamický rozsah vhodný pro preklinická farmakokinetická a toxikologická hodnocení
• Možnost aplikace na různé monoklonální protilátky bez rozsáhlé optimalizace

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření nSMOL metod v klinických studiích, automatizace přípravy vzorků a integrace s vysokorychlostními hmotnostními spektrometry. Další vývoj může zahrnovat multiplexní analýzu několika protilátek současně a přenos metod do rutinního farmaceutického QA/QC.

Závěr

Implementace technologie nSMOL v kombinaci s LCMS-8060 umožňuje rychlou, citlivou a robustní kvantifikaci Cetuximabu v potkaní plazmě. Validovaná metoda splňuje kritéria linearity, přesnosti a selektivity, což podporuje její využití při preklinických studiích a rozvoji bioanalytických platforem pro monoklonální protilátky.

Reference

1. EMA Guideline on Bioanalytical Method Validation, EMEA/CHMP/EWP/192217/2009 Rev.1 Corr.2
2. US FDA Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation, Draft September 2013 Rev.
3. Iwamoto N et al Analytical Scientist 139(3) 576–580 (2014)
4. Iwamoto N et al Analytical Methods 7(21) 9177–9183 (2015)