An AdvanceBio HIC Column for Drug‑to-Antibody Ratio (DAR) Analysis of Antibody Drug Conjugates (ADCs)
Aplikace | 2018 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Hydrofobní interakční chromatografie (HIC) představuje klíčovou techniku pro charakterizaci konjugátů protilátka–látka (ADC), umožňující rozlišení variant s odlišným poměrem látka–protilátka (DAR) za mírných podmínek, které zachovávají strukturální integritu biomolekul.
Cílem práce bylo ilustrovat vlastnosti kolony AdvanceBio HIC v kombinaci s bio-inertním systémem Agilent 1260 Infinity II LC pro rychlou a přesnou analýzu DAR u ADC, včetně optimalizace gradientu a porovnání výkonu různých délek kolony.
Metoda využívá mobilní fázi s fosfátovým pufrem a vysokou koncentrací síranu amonného ke zvýšení retence hydrofobních molekul, následovaný gradientem organického modifieru (propan-2-ol) pro selektivní eluci variant podle rostoucí hydrofobicity.
Seznam klíčové instrumentace:
Optimalizace gradientu propan-2-ol pro správnou eluci variant DAR6 a DAR8 zajistila kompletní separaci všech DAR frakcí. Kratší kolona (30 mm) při vyšším průtoku umožnila zkrácení doby rozdělení na 8 minut při zachování srovnatelných hodnot DAR (~4.4) oproti 24 minutovému běhu na kolóně 100 mm.
Bio-inertní konstrukce LC zabraňuje srážení soli a zachovává integritu vzorku při vysokých koncentracích síranu amonného.
Metoda poskytuje vysoké rozlišení bez denaturace pro rychlý screening a kvantifikaci DAR u cysteinově vázaných ADC, což zkracuje vývojové cykly a zvyšuje spolehlivost analýzy v QA/QC laboratořích.
Očekává se širší využití HIC v kombinaci s hmotnostní spektrometrií pro detailní charakterizaci ADC, dále integrace do plně automatizovaných platforem, miniaturizace sloupců pro vyšší propustnost a rozšíření na jiné formy biokonjugátů.
AdvanceBio HIC kolony ve spojení s bio-inertním Agilent 1260 Infinity II LC umožňují rychlou a přesnou analýzu DAR u ADC bez narušení struktury biomolekul, čímž podporují efektivní vývoj a kontrolu kvality terapeutických protilátek.
HPLC
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Hydrofobní interakční chromatografie (HIC) představuje klíčovou techniku pro charakterizaci konjugátů protilátka–látka (ADC), umožňující rozlišení variant s odlišným poměrem látka–protilátka (DAR) za mírných podmínek, které zachovávají strukturální integritu biomolekul.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem práce bylo ilustrovat vlastnosti kolony AdvanceBio HIC v kombinaci s bio-inertním systémem Agilent 1260 Infinity II LC pro rychlou a přesnou analýzu DAR u ADC, včetně optimalizace gradientu a porovnání výkonu různých délek kolony.
Použitá metodika a instrumentace
Metoda využívá mobilní fázi s fosfátovým pufrem a vysokou koncentrací síranu amonného ke zvýšení retence hydrofobních molekul, následovaný gradientem organického modifieru (propan-2-ol) pro selektivní eluci variant podle rostoucí hydrofobicity.
Seznam klíčové instrumentace:
- Agilent 1260 Infinity II bio-inert pumpa (G5654A)
- Agilent 1260 Infinity II multisampler s chlazením (G5668A)
- Agilent 1260 Infinity II termostat kolony s bio-inert výměníkem (G7116A)
- Agilent 1260 Infinity II DAD s bio-inert proudovou kyvetou (G7115A)
- AdvanceBio HIC kolony 4.6×100 mm a 4.6×30 mm
Hlavní výsledky a diskuse
Optimalizace gradientu propan-2-ol pro správnou eluci variant DAR6 a DAR8 zajistila kompletní separaci všech DAR frakcí. Kratší kolona (30 mm) při vyšším průtoku umožnila zkrácení doby rozdělení na 8 minut při zachování srovnatelných hodnot DAR (~4.4) oproti 24 minutovému běhu na kolóně 100 mm.
Bio-inertní konstrukce LC zabraňuje srážení soli a zachovává integritu vzorku při vysokých koncentracích síranu amonného.
Přínosy a praktické využití metody
Metoda poskytuje vysoké rozlišení bez denaturace pro rychlý screening a kvantifikaci DAR u cysteinově vázaných ADC, což zkracuje vývojové cykly a zvyšuje spolehlivost analýzy v QA/QC laboratořích.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se širší využití HIC v kombinaci s hmotnostní spektrometrií pro detailní charakterizaci ADC, dále integrace do plně automatizovaných platforem, miniaturizace sloupců pro vyšší propustnost a rozšíření na jiné formy biokonjugátů.
Závěr
AdvanceBio HIC kolony ve spojení s bio-inertním Agilent 1260 Infinity II LC umožňují rychlou a přesnou analýzu DAR u ADC bez narušení struktury biomolekul, čímž podporují efektivní vývoj a kontrolu kvality terapeutických protilátek.
Reference
- S. Zuo, Measuring Drug-to-Antibody Ratio (DAR) for Antibody Drug Conjugates (ADCs) with UHPLC/Q-TOF, Agilent Technologies Application Note, č. 5991-6559EN, 2016
- S. Schneider, Analysis of Cysteine-Linked Antibody Drug Conjugates, Agilent Technologies Application Note, č. 5991-8493EN, 2017
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Hydrophobic Interaction Chromatography- Native Mode Separation of Bio-Therapeutic Workflows
2018|Agilent Technologies|Postery
Sandeep kondaveetil1, Andy Coffey2, Priya Jayaraman1, Linda Llyod2, Suma Ramagiri1 Hydrophobic Interaction Chromatography- Native Mode Separation of Bio-Therapeutic Workflows 1. Agilent Technologies, Inc., Wilmington, DE USA 2. Agilent Technologies, Inc., Church Stretton, UK Experimental LC Conditions – mAb oxidized variant…
Klíčová slova
dar, darhic, hicoxidized, oxidizedmab, mabcolumn, columnadvancebio, advancebioretention, retentionmau, mautime, timemobile, mobileadcs, adcsmin, min𝑛𝑛drug, 𝑛𝑛drughydrophobic, hydrophobicantibody
Improving the Quality of Antibody Drug Conjugates by Orthogonal Analytical Methods
2024|Agilent Technologies|Příručky
Consumables Workflow Ordering Guide Improving the Quality of Antibody Drug Conjugates by Orthogonal Analytical Methods Antibody Drug Conjugates Antibody-drug conjugates (ADCs) represent a new generation of targeted biotherapeutics that make up a rapidly growing segment of the drug discovery pipeline.…
Klíčová slova
mylist, mylistcysteine, cysteinedar, daradc, adcadcs, adcslysine, lysinecolumn, columnlinker, linkerhic, hicauristatin, auristatinvedotin, vedotinantibody, antibodyintact, intactmmae, mmaeinfinitylab
Characterization of Antibody‑Drug Conjugates Using 2D-LC and Native MS
2021|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Biopharma/Pharma Characterization of Antibody‑Drug Conjugates Using 2D-LC and Native MS Authors David L. Wong and Sarah M. Stow Agilent Technologies, Inc. Abstract Antibody drug conjugates (ADCs), which comprise a monoclonal antibody (mAb) conjugated to a small molecule drug…
Klíčová slova
dimension, dimensiondar, daradcs, adcsadc, adcsecond, secondhic, hicnative, nativeadvancebio, advancebiocounts, countsmab, mabdrug, drugdeconvoluted, deconvolutedfirst, firstconjugated, conjugatedintact
Analysis of Monoclonal Antibodies and Antibody-Drug Conjugates Using New Hydrophobic Interaction Chromatography (HIC) Columns
2015|Thermo Fisher Scientific|Postery
150 Absorbance (mAU) including intact mAbs, mAb fragments, engineered variants, and antibody-drug conjugates (ADCs) are being developed for the treatment of cancer and other diseases due to their excellent biocompatibility and high selectivity. The proliferation of monoclonal antibody therapeutics and…
Klíčová slova
mab, mabmimic, mimicadc, adcmabpac, mabpachic, hicantibody, antibodyabsorbance, absorbanceconjugated, conjugatedmau, maudrug, drugcys, cysmonoclonal, monoclonaloxidized, oxidizeddar, darmobile
