Biologická léčiva jsou makromolekulární látky, peptidy, bílkoviny nebo segmenty nukleových kyselin, při jejichž přípravě se používají živé organismy nebo jejich produkty. Výroba bioléčiv patří mezi nejpřísněji regulované procesy, které zajištují vznik vysoce účinného a funkčního produktu.
Pomocí analýzy rizik se provádí identifikace kritických proměnných (CQA - Critical Quality Attributes), ovlivňujících finální kvalitu výrobku. CQA jsou fyzikální, chemické, biologické a mikrobiologické vlastnosti a charakteristiky přípravku, které mají splňovat určený limit, rozmezí a distribuci tak, aby byla zajištěna požadovaná kvalita.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Nabidka_Bio_HPLC_kolon_Agilent_Technologies_a6ea4026d8/HPST-Nabidka-BioHPLC-kolon-Agilent-Technologies.png" alt="HPST: Nabídka BioHPLC kolon Agilent Technologies"/>
<h3>Kolony Agilent Bio-Monolith Protein A a Protein G pro stanovení titru protilátek</h3>
Afinitní chromatografie je metoda izolace biologicky aktivních látek, která využívá vysoce specifických molekulárních interakcí mezi proteiny (např. antigen/protilátka). Stacionární fáze kolon se připravují navázáním afinitního ligandu na pevný nosič. Agilent nabízí několik výjimečných afinitních produktů, včetně monolitických kolon pro izolaci a kvantifikaci monoklonálních protilátek (mAb).
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Protein+A+G">Kolony Agilent Bio-Monolith Protein A a Protein G</a> jsou navrženy pro analytickou separaci všech lidských a myších podtříd Imunoglobulinu G (IgG). Poskytují rychlé a přesné kvantifikace titru protilátky a přečištění jejího malého množství pro další charakterizaci např. pomocí hmotnostní spektrometrie. Tyto monolitické kolony jsou tvořeny z poly(glycidyl methakrylát-ko-etylen dimetkrylátu) - s vrstvou Proteinu A nebo Proteinu G, izolovaného ze Staphylococcus aureus.
Kolony jsou kompatibilní s <a href="https://lcms.cz/products?category=39&amp;manufacturerItems=10">HPLC</a> a <a href="https://lcms.cz/products?category=40&amp;manufacturerItems=10">UHPLC</a> systémy, včetně Agilent 1100, 1200 a 1260 Bio-inertní kvartérní LC.
<blockquote>
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Monolith&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Dostupné on-line v našem e-shopu</a>
</blockquote>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=monolith">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Bio-Monolith Protein G column - More Options for mAb Titer Determination</li>
<li>Robust, Reliable Recombinant Protein A Monolith Column for Antibody Titer Determination</li>
<li>mAb Titer Analysis with the Agilent Bio-Monolith Protein A Column</li>
<li>Cell Culture Optimization Using an Agilent Bio-Monolith Protein A Column and LC/MS</li>
<li>Cell Clone Selection Using the Agilent Bio-Monolith Protein A Column and LC/MS</li>
<li>Reducing Cycle Time for Quantification of Human IgG Using the Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC Column</li>
<li>Agilent Bio-Monolith Protein A Monitors Monoclonal Antibody Titer from Cell Cultures</li>
<li>Agilent AdvanceBio Desalting-RP Cartridges for Online Desalting in 2D-LC/MS mAb Analysis</li>
<li>Protein A Affinity IgG Capture Followed by AdvanceBio SEC Aggregation Analysis</li>
<li>Biomolecule characterization workflow agilent bio-monolith protein a and protein g affinity columns</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony Agilent AdvanceBio SEC - pro monitorování agregace proteinů</h3>
Profil nečistot bioterapeutik má v bezpečnosti léčiv stále větší význam. Přestože jsou agregáty přítomny v extrémně nízkých koncentracích, mohou mít velký dopad na kvalitu produktu. Pro kvantifikaci a monitorování agregace proteinů, oligonukleotidů a dalších komplexních biopolymerů, např. pro analýzu analogů inzulinu, je proto chromatografie založená na dělení dle velikosti částic (SEC - Size Exclusion Chromatography) ideální metodou. 
Výběrem sorbentu o určité velikosti pórů ovlivňujeme rozsah molekulových hmotností analytů, které můžeme měřit na zvoleném sorbetu (tzv. vylučovací limit kolony).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Size_Exclusion_SEC_kolony_Agilent_Advance_Bio_172b8e8f42/HPST-Size-Exclusion-(SEC)-kolony-Agilent-AdvanceBio.png" alt="HPST - Size Exclusion (SEC) kolony Agilent AdvanceBio"/>
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+SEC+1.9&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Kolony AdvanceBio SEC 1.9 μm</a> a 2.7 µm pro stanovení agregace mAb a fragmentovou analýzu. Tyto kolony zmírňují interakce analytů s povrchem z nerezové oceli. Vyznačují se nízkým vnitřním průměrem 2.1 mm pro průtoky 0.05 až 0.10 ml/min a jsou ideální pro náročné analýzy proteinů. Jejich inertní hydrofilní povrch umožňuje používat nižší koncentraci těkavých aditiv v mobilní fázi, což vede k minimalizaci nespecifických interakcí. Kolony z nerezové oceli PEEK-lined neobsahují aktivní kovová místa, což snižuje potřebu prekondicionovaní kolony - a šetří čas a množství vzorků.
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Bio+SEC-3&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio SEC-3</a> - kolony se sférickými 3µm částicemi, pokrytými hydrofilní vrstvou (100 Å, 150 Å a 300 Å).
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Bio+SEC-5&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio SEC-5</a> - kolony se sférickými 5µm částicemi, pokrytými hydrofilní vrstvou (100 Å, 150 Å, 300 Å, 500 Å, 1000 Å a 2000 Å).
<blockquote>
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Size+Exclusion&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Dostupné on-line v našem e-shopu</a>
</blockquote>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?search=advancebio+sec&amp;mainauthorItems=10">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Agilent Biocolumns - Critical Quality Attributes - Aggregate Compendium </li>
<li>Agilent AdvanceBio SEC columns for peptides and proteins </li>
<li>Analysis of Antibody Fragment-Drug Conjugates Using an Agilent AdvanceBio SEC 120 Å 1.9 µm PEEK-Lined Column </li>
<li>Surmounting the Challenges of Bispecific Antibody Characterization</li>
<li>Analysis of Nanobodies Agilent AdvanceBio SEC 120 Å 1.9 μm and AdvanceBio HIC Columns</li>
<li>High Resolution Size Exclusion Chromatography Analysis of Small Therapeutic Proteins</li>
<li>High-Resolution, High-Throughput Size Exclusion Chromatography Analysis of Monoclonal Antibodies Using an Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 µm Column</li>
<li>Sensitive Native Mass Spectrometry of Macromolecules Using Standard Flow LC/MS</li>
<li>High Performance Size Exclusion Chromatography for Analysis of Covalent High Molecular Weight Insulin</li>
<li>Size Exclusion Chromatography Analysis of a Monoclonal Antibody and Antibody Drug Conjugate Using an Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 µm Column</li>
<li>Size Exclusion Chromatography of Biosimilar and Innovator Insulin</li>
<li>Characterization of mAb aggregation</li>
<li>Size Exclusion Chromatography in the Presence of an Anionic Surfactant</li>
<li>Fast, High-Resolution Size Exclusion Chromatography of Aggregates in Biotherapeutics</li>
<li>Separate and Quantify Rituximab Aggregates and Fragments with High-Resolution SEC</li>
<li>Size Exclusion Chromatography Analysis of Antibody Drug Conjugates</li>
<li>Protein A Affinity IgG Capture Followed by AdvanceBio SEC Aggregation Analysis</li>
<li>Online 2D-LC Characterization of Monoclonal Antibodies with Size Exclusion and Weak Cation Exchange Chromatography</li>
<li>Analysis of PEGylated Proteins with Agilent AdvanceBio SEC columns</li>
<li>Quantitation of mAb and ADC Aggregation Using SEC and an Aqueous Mobile Phase</li>
<li>Comparison of Biosimilar and Innovator Monoclonal Antibody Rituximab Using the Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC System and Agilent OpenLAB Match Compare Software</li>
<li>Does Tween 20 affect Monoclonal Antibody Separation?</li>
<li>Choosing the Right Calibration for the Agilent Bio SEC-3 Column</li>
<li>Analysis of Antibody Drug Conjugates Using SEC and Mass Spectrometry</li>
<li>Defining the Optimum Parameters for Efficient Size Separations of Proteins</li>
<li>Characterization of monoclonal antibodies on the Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC by Size Exclusion Chromatography using the Agilent BioSEC columns</li>
<li>Fast Separation of Monoclonal Antibody and Dimer by SEC with Agilent Bio SEC</li>
<li>Multiple Detector Approaches to Protein Aggregation by SEC</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>HPLC Kolony s reverzní stacionární fází (SF), s částicemi &gt;150 Å pro stanovení intaktních proteinů</h3>
<h5>Kolony Agilent <a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?filters%5bmanufacturers%5d=agilent-technologies&amp;s=PLRP-S+">PLRP-S</a> 1000 Å 5 μm</h5>
<ul>
<li>fáze na bázi poly(styrene/divinylbenzene) pro separaci biomolekul</li>
<li>teplotně i chemicky velice stabilní, rozsah pH 1 – 14, teplota až 200 °C</li>
<li>zrnitost od 3 do 50 µm</li>
</ul>
Absence zbytkových silanolových skupin umožňuje zlepšení tvaru píku. Hardware lemovaný PEEK kolony navíc minimalizuje riziko artefaktů - jako je oxidace - v důsledku sekundárních kovových interakcí.
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+RP-mAb&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio RP-mAb</a> – pro analýzu monoklonálních protilátek</h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=RRHD+300&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">ZORBAX RRHD – 300A</a> – pro UHPLC analýzy</h5>
<ul>
<li>max. tlak 1200bar – optimalizované pro <a href="https://lcms.cz/products/154">UHPLC 1290 Infinity</a>, vhodné pro další UHPLC/UPLC přístroje</li>
<li>12 selektivních fází, zrnitost 1.8 µm</li>
<li>snadný přechod z 3.5 a 5 µm díky stejné selektivitě fází</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_HPLC_kolony_s_reverzni_stacionarni_fazi_SPP_Superficially_Porous_Particles_TPP_Totally_Porous_2_m_Particles_06c0fbeb3c/HPST-HPLC-kolony-s-reverzni-stacionarni-fazi-(SPP-Superficially-Porous-Particles-TPP-Totally-Porous-2-m-Particles).png" alt="HPST: HPLC kolony s reverzní stacionární fází (SPP - Superficially Porous Particles, TPP - Totally Porous 2 µm Particles)"/>
<h5>ZORBAX 300 StableBond</h5>
HPLC kolony Agilent ZORBAX 300Å StableBond jsou ideální volbou pro reprodukovatelné separace proteinů a peptidů. Tyto kolony jsou k dispozici ve čtyřech stacionárních fázích: C18, C8, C3 a Diphenyl. 
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Poroshell+300&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Poroshell 300</a></h5>
<ul>
<li>velikost pórů 300 Å poskytuje vysokou účinnost separace</li>
<li>čtyři různé stacionární fáze - 300 SB-C18, 300 SB-C8, 300 SB-C3 a 300 Extend-C18</li>
<li>kolonu Poroshell 300 Extend-C18 lze použít při pH od 2 do 11</li>
<li>možná separace peptidů a proteinů až do 500 - 1 000 kDa při tlaku 400/600 bar</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Poroshell_300_HPLC_kolony_db23e88c0f/HPST-Agilent-Poroshell-300-HPLC-kolony.jpg" alt="HPST: HPLC kolony Agilent Poroshell 300"/>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Reversed+Phase">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Ion-Pair Reversed-Phase Purification of De-Protected Oligonucleotides – Choice of Pore Size</li>
<li>Use Temperature to Enhance Oligonucleotide Mass Transfer and Improve Resolution in Ion-Pair RP HPLC</li>
<li>Improved Column Lifetime with Thermally Stable Polymer Columns for Oligonucleotide Ion-Pair RP HPLC</li>
<li>Efficient Monoclonal Antibody and Antibody Drug Conjugate Desalting Prior to Mass Spectrometry using AdvanceBio Desalting-RP Cartridges </li>
<li>Cell Clone Selection Using the Agilent Bio-Monolith Protein A Column and LC/MS </li>
<li>2D-LC as automated desalting tool for MSD analysis </li>
<li>Agilent AdvanceBio Desalting-RP Cartridges for Online Desalting in 2D-LC/MS mAb Analysis </li>
<li>Application of AdvanceBio Desalting - RP Cartridges for LC/MS Analysis of mAbs </li>
<li>Characterize Fab and Fc Fragments by Cation-exchange Chromatography </li>
<li>LC/MS Analysis of Intact Therapeutic Monoclonal Antibodies Using AdvanceBio RP-mAb</li>
<li>Fast and High Resolution Analysis of Intact and Reduced Therapeutic Monoclonal Antibodies</li>
<li>Identifying Monoclonal Antibody Mutation Sites Using 2D-LC with Q-TOF LC/MS</li>
<li>Separation of Native Monoclonal Antibodies and Identification of Charge Variants</li>
<li>Characterization of Glycosylation in the Fc Region of Therapeutic Recombinant Monoclonal Antibody</li>
<li>Intact Protein Analysis Using an Agilent 6550 Q-TOF Mass Spectrometer</li>
<li>Analysis of Monoclonal Antibody (mAb) Using Agilent 1290 Infinity LC System Coupled to Agilent 6530 Accurate-Mass Quadrupole Time-of-Flight (Q-TOF)</li>
<li>Accurate Mass Measurement for Intact Proteins using ESI-oa-TOF</li>
<li>Protein Confirmation Using the LC/MSD TOF and the Agilent TOF Protein Confirmation Software</li>
<li>Fast Separation of Large and Heterogeneous Proteins Using ZORBAX Poroshell C18, C8, and C3 Phases.</li>
<li>Effect of Flow Rate on Ultra-fast Separations of Proteins on Porous and Superficially Porous Particle Columns</li>
<li>Using Poroshell 300SB-C18 for High-Sensitivity, High-Throughput Protein Analysis on the Agilent LC/MSD</li>
<li>Fast Protein Separations Using Agilent Poroshell 300</li>
<li>LC/MS of Intact Adeno-Associated Virus (AAV) Capsid Proteins for Product Identity</li>
<li>Characterization of Viral Vector Particles Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony s reverzní stacionární fází (SF), s částicemi &lt;150 Å pro mapování peptidů</h3>
Mapování peptidů lze použít ke komplexní identifikaci primární struktury proteinu, která umožnuje identifikaci fragmentů generovaných při štěpení proteinů pomocí enzymů, např. trypsinu. Různé proteiny poskytují různé peptidové „otisky prstů“.
<h5>AdvanceBio Peptide Mapping - Peptidové mapování</h5>
Kolony HPLC jsou uřčený pro identifikaci proteinů a stanovení posttranslačních modifikací. Kolony umožňují rychlou identifikaci aminokyselinové substituce/modifikace v primární sekvenci proteinu. Kolony jsou povrchově porézní a mají velikost pórů 120 Å, což je optimální pro analýzu peptidů produkovaných enzymatickým štěpením proteinů. 
<h5>AdvanceBio 2.7 μm EC-C18</h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+peptide+plus&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio Peptide Plus</a></h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=ZORBAX+Extend&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">ZORBAX 300Extend-C18</a></h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+Amino+Acid+Analysis&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio Amino Acid Analysis</a> (AAA)</h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Reversed+Phase">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>High-Resolution Mapping of Drug Conjugated Peptides in an ADC Digest</li>
<li>Comparison of Biosimilar and Innovator Monoclonal Antibody Rituximab Using the Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC System and Agilent OpenLAB Match Compare Software</li>
<li>High Resolution Glycopeptide Mapping of EPO Using an Agilent AdvanceBio Peptide Mapping Column</li>
<li>Separation of IgG Glycopeptides using HILIC-LC/MS in Comparison to RP-LC/MS</li>
<li>Peptide Mapping of Innovator and Biosimilar Monoclonal Antibody</li>
<li>Peptide Mapping: A Quality by Design (QbD) Approach</li>
<li>Making Peptide Mapping Routine with the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF</li>
<li>Reversed-phase LC primary structure characterization workflow</li>
<li>High Resolution and Rapid Peptide Mapping of Monoclonal Antibody Using an Agilent 1290 Infinity UHPLC and an Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS System</li>
<li>Fast and Efficient Peptide Mapping of a Monoclonal Antibody (mAb): UHPLC Performance with Superficially Porous Particles</li>
<li>Analysis of Amino Acids Derived Online Using an Agilent AdvanceBio AAA Column</li>
<li>Determination of Amino Acid Composition of Cell Culture Media and Protein Hydrosylate Standard</li>
</ul>
</blockquote>

BioHPLC kolony Agilent pro analýzy makromolekulárních látek - část 1

<a href="https://lcms.cz/article/1556">V první části</a> přehledového článku o Agilent BioHPLC kolonách pro analýzy makromolekulárních látek jsme se blíže podívali na možnosti a použití kolon typu Bio-Monolith Protein A a Protein G pro stanovení titru protilátek, AdvanceBio SEC pro monitorování agregace proteinů, kolony s reverzní stacionární fází pro stanovení intaktních proteinů nebo mapování peptidů.
<h3>Iontově výměnná chromatografie pro analýzy nabitých molekul</h3>
Přítomnost pozitivně a negativně nabitých skupin ve struktuře proteinu znamená, že proteiny jsou mnohonásobně nabité. Celkový kladný nebo záporný náboj molekuly závisí na hodnotě izoelektrického bodu peptidu či proteinu a na pH okolního prostředí. Některé peptidy či proteiny budou tedy při zvoleném pH kladně nabité, jiné záporně nabité. Této vlastnosti peptidů a proteinů se využívá při iontově výměnné chromatografii (IEC).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Iontove_vymenna_chromatografie_pro_analyzy_nabitych_molekul_2991b7b3a9/HPST-Iontove-vymenna-chromatografie-pro-analyzy-nabitych-molekul.png" alt="HPST: IEC/IEX chromatografie pro analýzy nabitých molekul"/>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Agilent+Bio+IEX&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio IEX</a></h5>
Agilent Bio Ion-Exchange HPLC kolony jsou naplněny polymerními neporézními iontoměničovými částicemi. Byly vyvinuty pro separaci peptidů, oligonukleotidů a proteinů. Rodina Bio IEX nabízí fáze se silným katexem (SCX), slabým katexem (WCX), silným anexem (SAX) a slabým anexem (WAX). Všechny fáze Bio Ion-Exchange jsou k dispozici ve velikostech neporézních částic 1.7; 3; 5 a 10 μm. 
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Agilent+Bio+mAb&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio mAb</a></h5>
Kolony vyvinuté pro charakterizaci monoklonálních protilátek. Kolony Bio mAb jsou k dispozici ve velikostech 1.7 μm, 3 μm, 5 μm a 10 μm. Menší částice poskytuji vyšší rozlišení.
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=PL-SCX&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">PL-SCX</a></h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Bio-Monolith&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Bio-Monolith</a></h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=bio+iex">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Anion Exchange Chromatography Workflow</li>
<li>Faster Separations Using Agilent Weak Cation Exchange Columns</li>
<li>Online 2D-LC Analysis of Complex N-Glycans in Biopharmaceuticals Using the Agilent 1290 Infinity 2D-LC Solution</li>
<li>Charge Profiling of 2AB-labelled N-linked Glycans</li>
<li>Cation Exchange Chromatography Workflow</li>
<li>Analysis of E.coli Tryptic Digest and Intact Protein Using the Agilent 1290 Infinity 2D-LC Solution with Diode Array Detection and Q-TOF LC/MS</li>
<li>Analysis of proteins by anion exchange chromatography</li>
<li>Optimizing Protein Separations with Agilent Weak Cation-Exchange Columns</li>
<li>High-resolution Analysis of Charge Heterogeneity in Monoclonal Antibodies Using pH-gradient Cation Exchange Chromatography</li>
<li>Combining small-scale purification and analysis of monoclonal antibodies on one instrument</li>
<li>Analysis of Intact and C-terminal Digested IgG1 on an Agilent Bio MAb NP5 Column</li>
<li>Seamless Method Transfer from a 1260 Infinity Bio-inert LC to a 1260 Infinity II Bio-inert LC</li>
<li>Application of AdvanceBio Desalting - RP Cartridges for LC/MS Analysis of mAbs</li>
<li>Characterize Fab and Fc Fragments by Cation-exchange Chromatography</li>
<li>Characterize mAb Charged Variants by Cation-exchange Chromatography</li>
<li>Simple Method Optimization in mAb Charge Variant Analysis using pH Gradients Generated from Buffer Advisor with Online pH and Conductivity Monitoring</li>
<li>pH Gradient Elution for Improved Separation of Monoclonal Antibody Charge Variants</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony AdvanceBio využívající hydrofilní interakce (HILIC) pro analýzy glykanů</h3>
Glykoproteiny jsou proteiny s navázanými sacharidy. Proces, kterým se tyto sacharidy na protein navazují, se označuje jako glykosylace a je to nejčastější kotranslační nebo posttranslační modifikace proteinů. Tyto úpravy molekul ovlivňují její vlastnosti a mohou mít vliv na imunosupresi nebo naopak imunoaktivaci biopřípravků. 
Analýza N-Glycanu často zahrnuje označení uvolněných glykanů značkou, která umožní fluorescenční detekci (FLD) a také zvýšení ionizace pro hmotnostní spektrometrii (MS). Nejčastěji používanou značkou pro tento typ analýz je 2-aminobenzamid (2-AB).
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+Glycan+Mapping&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">**AdvanceBio Glycan Mapping **</a></h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=AdvanceBio+Glycan">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Analysis of Monoclonal Antibody N-glycans by Fluorescence Detection and Mass Selective Detection Using LC/MSD XT </li>
<li>Streamlined Workflows for N-Glycan Analysis of Biotherapeutics with LC/FLD/MS </li>
<li>Comparison of Relative Quantification of Monoclonal Antibody N-glycans Using Fluorescence and MS Detection </li>
<li>A Comprehensive Approach for Monoclonal Antibody N-linked Glycan Analysis from Sample Preparation to Data Analysis </li>
<li>Profiling Glycosylation of Monoclonal Antibodies at Three Levels Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF </li>
<li>Fast and Efficient HILIC Methods for Improved Analysis of Complex Glycan Structures </li>
<li>A Novel HILIC Column for High Speed N-linked Glycan Analysis </li>
<li>Sensitive and Reproducible Glycan Analysis of Human Immunoglobulin G </li>
<li>Separation of IgG Glycopeptides using HILIC-LC/MS in Comparison to RP-LC/MS</li>
<li>N-Glycan Analysis of mAbs and Other Glycoproteins with UHPLC and Fluorescence DetectionThe Agilent 1290 Infinity Binary LC System with the Agilent AdvanceBio Glycan Mapping Column</li>
<li>Agilent Solutions for High-throughput N-linked Glycan Profiling from Biotherapeutics</li>
<li>Analysis of N-Linked Glycans from Antibody-Drug Conjugate (ADC) Using the Agilent AssayMAP Automated Sample Preparation and Agilent 1290 Infinity LC System</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony AdvanceBio HIC (Hydrophobic Interaction Chromatography) využívající hydrofobní interakce pro analýzy např. intaktních nativních bílkovin</h3>
Výhodou této metody je minimalizace či úplné odstranění případné denaturace peptidů a bílkovin, která je velice častým problémem při použití reverzní chromatografie. HIC kolony mají výrazně nižší hustotu pokrytí nosiče než reverzní stacionární fáze. Dalším výrazným rozdílem HIC techniky od reverzní chromatografie je používání vodné mobilní fáze o vysoké iontové síle a neutrálním pH.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Kolony_Advance_Bio_HIC_Hydrophobic_Interaction_Chromatography_8cecde704a/HPST-Kolony-AdvanceBio-HIC-(Hydrophobic-Interaction-Chromatography).png" alt="HPST: Kolony AdvanceBio HIC (Hydrophobic Interaction Chromatography)"/>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+HIC&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio HIC</a></h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=HIC">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>AdvanceBio HIC: a New Hydrophobic HPLC Column for Monoclonal Antibody (mAb) Variant Analysis </li>
<li>A New AdvanceBio HIC Column for Drug to Antibody Ratio (DAR) Analysis of Antibody Drug Conjugates (ADC)</li>
</ul>
</blockquote>
Pokud potřebnou kolonu nenaleznete, kontaktujte nás na e-mail (info@hpst.cz)

BioHPLC kolony Agilent pro analýzy makromolekulárních látek - část 2

Agilent Technologies LC kolony jsou mezi uživateli velice oblíbené díky svým vynikajícím vlastnostem, vysoké kvalitě a stabilitě v široké řadě aplikací. Agilent vyrábí HPLC a UHPLC kolony pro analýzu malých molekul, chirální separace a mnoho dalších specifických aplikací.
<a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/5991_9013_EN_Infinity_Lab_Poroshell120_poster_6a833a000b/5991-9013EN_InfinityLab_Poroshell120_poster.pdf">Kolony InfinityLab Poroshell 120</a> jsou založeny na technologii povrchově porézních částic. Tato technologie se skládá z pevného jádra z oxidu křemičitého a porézní vnější vrstvy, v jejíchž pórech dochází k difuzi analytu a přenosu hmoty. Ve srovnání s tradičními zcela porézními částicemi stejné (nebo podobné) velikosti poskytují částice InfinityLab Poroshell vyšší chromatografickou účinnost a umožňují rychlé separace s vysokým rozlišením.
<h5>Vlastnosti Poroshell kolon:</h5>
<ul>
<li>Vynikající reprodukovatelnost mezi šaržemi díky jednokrokovému výrobnímu procesu (obr.1).</li>
<li>Snadný přechod z HPLC metod na UHPLC. Kolony InfinityLab Poroshell 120 jsou k dispozici ve třech různých průměrech částic (1,9 μm, 2,7 μm a 4 μm ) - umožňují vybrat velikost, která nejlépe vyhovuje vašim separačním potřebám a je nejkompatibilnější s vašimi systémy (obr.2).</li>
<li>Jednoduchý vývoj metod. Nabídka širokého spektra různých fází.</li>
<li>Dlouhá životnost kolon.</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_1_reprodukovatelnost_fc537e68c3/Obr-1.reprodukovatelnost.png" alt="Obr. 1. Reprodukovatelnost InfinityLab Poroshell"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_2_Velikost_castic_01_01_29dd6682a5/Obr.2.-Velikost-castic-01-01.png" alt="Obr. 2. Velikost castic InfinityLab Poroshell"/>
Agilent nyní nabízí až 19 různých fází kolon <a href="https://lcms.cz/products/153">Poroshell 120</a>. Každá stacionární fáze poskytuje odlišné kombinace hydrofobicity, silanolové aktivity, hydrolytické stability a chemické interakce s analytem. Přehled širokého portfolia kolon Proshell 120 s různými stacionárními fázemi naleznete <a href="https://www.agilent.com/en/products/liquid-chromatography/lc-columns/infinitylab-poroshell-columns">zde</a>. 
Novým přírůstkem do rodiny kolon Poroshell 120 jsou kolony s částicemi, které mají velmi nízce nabitý povrch, čehož lze využít zejména pro analýzy bazických sloučenin v mobilních fázích s nízkou iontovou silou. Jde o kolony Poroshell 120 CS C-18. 
V případě zájmu nám neváhejte napsat na info@hpst.cz
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Akce_HPLC_kolony_Poroshell_4ece424b95/HPST-Akce-HPLC-kolony-Poroshell.png" alt="HPST: Akce spotřební materiál a HPLC kolony Poroshell"/>
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=poroshell&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Nabídka HPLC kolon Poroshell v E-shopu HPST.</a>

Velká rodina kolon Poroshell 120

V předchozím článku <a href="https://www.lcms.cz/article/913">Velká rodina kolon Poroshell 120</a> jsme se podívali na základní přehled a vlastnosti kolon <a href="https://lcms.cz/products/153">Agilent InfinityLab Poroshell 120</a>. Tyto kolony nabízí až 19 různých fází, kde každá stacionární fáze poskytuje odlišné kombinace hydrofobicity, silanolové aktivity, hydrolytické stability a chemické interakce s analytem.
<h5>Vlastnosti Poroshell kolon:</h5>
<ul>
<li>Vynikající reprodukovatelnost mezi šaržemi díky jednokrokovému výrobnímu procesu (obr.1).</li>
<li>Snadný přechod z HPLC metod na UHPLC. Kolony InfinityLab Poroshell 120 jsou k dispozici ve třech různých průměrech částic (1,9 μm, 2,7 μm a 4 μm ) - umožňují vybrat velikost, která nejlépe vyhovuje vašim separačním potřebám a je nejkompatibilnější s vašimi systémy (obr.2). </li>
<li>Ke šem stacionárním fázím plně porézních kolon Zorbax existuje adekvátní kolona s pevným jádrem Poroshell, a jak je vidět z následujícího grafu (obr.3), při převodu metod z plně porézních kolon na kolony s pevným jádrem nedochází k posunu retenčních časů. A to je další velkou výhodou v oblasti chromatografických analýz. Další detaily k převodu metod lze najít v aplikačním listu <a href="https://www.lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/5990_6588_EN_4b84569543/5990-6588EN.pdf">Transfer metod mezi Poroshell 120 EC-C18 a ZORBAX Eclipse Plus C18 kolonami</a>. </li>
<li>Jednoduchý vývoj metod. Nabídka širokého spektra různých fází.</li>
<li>Dlouhá životnost kolon.</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_1_reprodukovatelnost_fc537e68c3/Obr-1.reprodukovatelnost.png" alt="Obr. 1. Reprodukovatelnost InfinityLab Poroshell"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_2_Velikost_castic_01_01_29dd6682a5/Obr.2.-Velikost-castic-01-01.png" alt="Obr. 2. Velikost castic InfinityLab Poroshell"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_3_Srovnani_retencnich_casu_kolon_Poroshell_120_EC_C18_a_Zorbax_EC_C18_za_podminek_uvedenych_v_diagramu_18e9a5bfd5/Obr.-3.-Srovnani-retencnich-casu-kolon-Poroshell-120-EC-C18-a-Zorbax-EC-C18-za-podminek-uvedenych-v-diagramu..jpg" alt="Obr. 3. Srovnání retenčních časů kolon Poroshell 120 EC-C18 a Zorbax EC-C18 za podmínek uvedených v diagramu."/>
Obr. 4. znázorňuje jednoduchý manuál pro rychlý výběr vhodné stacionární fáze. Agilent doporučuje jako kolonu základní volby pro většinu aplikací Poroshell EC-C18, která společně s fázemi HILIC-Z a PFP pokrývají téměř celé spektrum aplikací (až 95 %).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_4_Prehled_dostupnych_stacionarnich_fazi_kolon_Poroshell_120_s_priklady_jejich_pouziti_d6b5c7a5a1/Obr.-4.-Prehled-dostupnych-stacionarnich-fazi-kolon-Poroshell-120-s-priklady-jejich-pouziti..png" alt="Obr. 4. Přehled dostupných stacionárních fází kolon Poroshell 120 s příklady jejich použití."/>
Na následujícím obr. 5 lze ilustrovat na praktické aplikaci použití kolon Poroshell SB-Aq s různým průměrem částic, pro separaci polárních vitaminů. Uvedené chromatogramy pak dokládají, jak lze vhodně zvolenou velikostí částic, vnitřním průměrem a délkou kolony s pevným jádrem zkrátit čas analýzy z původních 8 minut zhruba až na 3 minuty. 
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_5_Chromatogramy_analyzy_vitaminu_skupiny_B_d8ae15013d/Obr.-5-Chromatogramy-analyzy-vitaminu-skupiny-B..png" alt="Obr. 5 Chromatogramy analýzy vitaminů skupiny B."/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Tab_1_Podminky_analyticke_metody_stanoveni_vitaminu_skupiny_B_7b6eca5766/Tab.-1.-Podminky-analyticke-metody-stanoveni-vitaminu-skupiny-B..png" alt="Tab. 1. Podmínky analytické metody stanovení vitaminů skupiny B."/>
Následující srovnávací tabulka (tab.2) pak dokládá, nejen jak se snižuje čas analýzy pro jednotlivé kolony, ale rovněž jak se snižuje objem spotřebovaných rozpouštědel, a naopak zvyšuje počet vzorků, které analytik může analyzovat použitím dané metody během osmihodinové pracovní směny.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Tab_2_Srovnani_parametru_analyz_pro_kolony_Poroshell_120_SB_Aq_ruznych_velikosti_4_6x150_mm_4_mm_fialova_3_0x100_mm_2_7_mm_fialova_2_1x50_mm_1_9_mm_fialova_27da507282/Tab.-2.-Srovnani-parametru-analyz-pro-kolony-Poroshell-120-SB-Aq-ruznych-velikosti-4.6x150-mm-4-mm-(fialova)-3.0x100-mm-2.7-mm-(fialova)-2.1x50-mm-1.9-mm-(fialova)..png" alt="Tab. 2. Srovnání parametrů analýz pro kolony Poroshell 120 SB-Aq různých velikostí: 4.6x150 mm, 4 μm (fialová); 3.0x100 mm, 2.7 μm (fialová); 2.1x50 mm, 1.9 μm (fialová)."/>
<h3>UHPLC kolony Poroshell s částicemi 1.9 μm</h3>
Dobrou zprávou pro uživatele UHPLC systémů je, že Agilent rozšířil v posledních letech rodinu kolon s pevným jádrem také o UHPLC kolony s velikostí částic 1.9 μm. Jak již bylo uvedeno v předchozích odstavcích, jednou z hlavních předností kolon s pevným jádrem je srovnatelná nebo dokonce vyšší separační účinnost v porovnání s plně porézními kolonami při nižším dosahovaném tlaku. 
V případě UHPLC systému již uživatel není limitovaný tlakem, a proto Agilent přichází s řadou kolon s pevným jádrem o velikosti částic 1.9 μm, které nabízí o 20 % vyšší separační účinnost při srovnatelných tlacích jako klasické plně porézní UHPLC kolony s částicemi 1.8 μm. Jak je vidět na následujícím grafu (obr. 6) ze srovnání křivek získaných z Van Deemterové rovnice, pro jednotlivé kolony plyne, že v oblasti optimální lineární rychlosti je separační účinnost zhruba o 20 % vyšší.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_6_Van_Deemterove_krivky_pro_kolony_Poroshell_120_1_9_mm_zelena_a_Zorbax_RRHD_1_8_mm_modra_aff6657353/Obr.-6.-Van-Deemterove-krivky-pro-kolony-Poroshell-120-1.9-mm-(zelena)-a-Zorbax-RRHD-1.8-mm-(modra)..jpg" alt="Obr. 6. Van Deemterové křivky pro kolony Poroshell 120 1.9 μm (zelená) a Zorbax RRHD 1.8 μm (modrá)."/>
Kromě vyšší separační účinnosti je další předností UHPLC kolon Poroshell delší životnost, kterou lze demonstrovat na následujícím grafu (obr. 7). Je zde srovnání počtu nástřiků za uvedených podmínek pro reálné vzorky naftalenu ve skupině kolon s pevným jádrem od různých výrobců a na první pohled lze konstatovat, že UHPLC kolony Poroshell 1.9 μm od Agilentu vykazují srovnatelné chování i po 5000 nástřicích.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Obr_7_Srovnani_zivotnosti_kolon_s_pevnym_jadrem_od_ruznych_vyrobcu_za_podminek_uvedenych_v_legende_c8c2f36244/Obr.-7.-Srovnani-zivotnosti-kolon-s-pevnym-jadrem-od-ruznych-vyrobcu-za-podminek-uvedenych-v-legende..png" alt="Obr. 7. Srovnání životnosti kolon s pevným jádrem od různých výrobců za podmínek uvedených v legendě."/>
Nejnovějším přírůstkem do rodiny kolon Poroshell 120 jsou kolony s částicemi, které mají velmi nízce nabitý povrch, čehož lze využít zejména pro analýzy bazických sloučenin v mobilních fázích s nízkou iontovou silou. Jde o kolony Poroshell 120 CS-C18. Jako příklad můžeme uvést <a href="https://www.lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/application_basic_analytes_peak_shape_poroshell_120_cs_c18_5994_2094en_agilent_34cb5d22ff/application-basic-analytes-peak-shape-poroshell-120-cs-c18-5994-2094en-agilent.pdf">analýzu problematických polárních pesticidů na systému LC/MS Agilent 1290</a>.
Už nyní pro vás chystáme pokračování článku, kde se plánujeme zaměřit na další praktické aplikace s využitím kolon Poroshell 120 CS-C18. Malou ochutnávku nabízíme formou <a href="https://www.labicom.cz/cogwpspogd/uploads/2020/11/Polar-Pesticides_webinar_2020DEC02_Final_PDF-ready-002.pdf">krátké prezentace firmy Agilent pro stanovení polárních pesticidů, včetně glyfosátu pomocí LC/MS</a>, která shrnuje a rozšiřuje výsledky zmíněného předchozího aplikačního listu.
V případě zájmu nám neváhejte napsat na info@hpst.cz
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=poroshell&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Nabídka HPLC kolon Poroshell v E-shopu HPST.</a>

UHPLC kolony Agilent InfinityLab Poroshell s částicemi 1.9 μm

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Je autorizovaným distributorem společnosti Agilent Technologies pro Českou republiku v oblastech chromatografie (GC, HPLC, UHPLC, kapilární elektroforéza) a hmotnostní spektrometrie (GC/MS, LC/MS, CE/MS), disolučních aparátů, molekulární (UV-Vis, UV-Vis-NIR, fluorescence, FTIR analyzátory a mikroskopy) a atomové spektroskopie (ICP-OES, ICP-MS, AAS), a v neposlední řadě také v oblasti molekulární biologie a genomiky (analýza nukleových kyselin a proteinů, microarray skenery a skla, PCR & RT-PCR, qPCR, řešení pro NGS, reagencie pro mutagenezi a klonování, sondy FISH a další).

Altium International

Praktický kurz Škola SW Chromeleon 7 při využití v LC/IC/GC/MS - online

45. Moderní elektrochemické metody 

Waters Seminář FOOD & Water

Uncovering Microplastics: Identification, Quantification, and Exposure Assessment

Size variant analysis of antibodies and ADCs using SEC, SEC-MALS, SEC-MS, and 2D Protein A-SEC Methods

Beyond C18 and Phenyl: Expanding Selectivity with Biphenyl Columns Built for UV and pH Robustness