Jak bezpečně převést LC kolonu do jiné mobilní fáze: správný postup výměny rozpouštědel

Výměna rozpouštědel v LC koloně musí být prováděna opatrně, aby nedošlo k nevratnému poškození kolony.

Téma vychází z častého dotazu zákazníků:

„Moje kolona byla dodána v hexanu, ale potřebuji ji používat s vodou a acetonitrilem. Jak mám rozpouštědla v koloně správně vyměnit?“

Tento článek popisuje postup výměny rozpouštědel v koloně, způsoby zjištění rozpouštědla, ve kterém byla kolona dodána, výběr vhodného přechodového rozpouštědla a důvody, proč je správný postup tak důležitý.

Krok 1: Zjištění rozpouštědla, ve kterém byla kolona dodána

Před zahájením výměny rozpouštědel je nutné zjistit, v jakém rozpouštědle nebo mobilní fázi byla kolona dodána.

Tyto informace lze obvykle nalézt v:

• Návodu pro údržbu kolony (Column Care Guide)
• Certifikátu kvality (Certificate of Quality Assurance, CQA)

Návod pro údržbu kolony

Návod pro údržbu bývá dostupný na webových stránkách výrobce u konkrétní produktové řady kolon.

• V části Shipping Solvent je uvedeno, v jakém rozpouštědle jsou jednotlivé typy kolon dodávány.
• Sekce Mobile Phase Compatibility slouží ke kontrole kompatibility mobilních fází a případných omezení jejich použití.

Certifikát kvality (CQA)

Dalším zdrojem informací je certifikát kvality.

V části Test Conditions jsou uvedeny mobilní fáze použité při testování kolony.

• V příkladu uvedeném ve videu byla kolona Luna testována za podmínek:
  • 75 % acetonitrilu
  • 25 % vody

Testovací podmínky často odpovídají rozpouštědlu, ve kterém je kolona dodávána, neplatí to však vždy.

Pokud si nejste jisti, doporučuje se kontaktovat přímo výrobce kolony.

Krok 2: Kontrola mísitelnosti rozpouštědel

Jakmile zjistíte, v jakém rozpouštědle byla kolona dodána, je nutné ověřit jeho mísitelnost s mobilními fázemi používanými v metodě.

K tomu lze využít tabulku mísitelnosti rozpouštědel.

Voda a nemísitelná rozpouštědla

Voda není mísitelná s několika běžně používanými LC rozpouštědly, například:

• Hexanem
• Dichlormethanem (DCM)
• Heptanem

Tato rozpouštědla se běžně používají v NP chromatografii.

Isopropanol (IPA)

Isopropanol (IPA) je mísitelný se všemi LC rozpouštědly uvedenými ve videu, a proto se běžně používá při přechodu mezi nemísitelnými rozpouštědly, například mezi vodou a hexanem nebo mezi vodou a heptanem.

Krok 3: Postup výměny rozpouštědel

Jakmile je ověřena mísitelnost použitých rozpouštědel, lze přistoupit k jejich výměně.

1. Proplach isopropanolem (IPA)

Kolonu proplachujte isopropanolem v rozsahu:

• 30–60 objemů kolony

2. Proplach čistým rozpouštědlem

Následně kolonu propláchněte čistým rozpouštědlem v množství odpovídajícím:

• 10 objemům kolony

3. Ekvilibrace mobilní fází

Nakonec kolonu ekvilibrujte mobilní fází nebo mobilními fázemi používanými v analytické metodě.

Příklad postupu výměny rozpouštědel

Video uvádí následující modelový příklad.

Výchozí stav

• Kolona je dodána ve smesi:
  • 99 % hexanu
  • 1 % acetonitrilu

Proplach acetonitrilem

• Následně se kolona propláchne acetonitrilem v množství odpovídajícím:
  • 10 objemům kolony

Mezikrok

• Následuje proplach:
  • 10 objemy kolony acetonitrilu

Konečná ekvilibrace

• Poté se kolona ekvilibruje pomocí:
  • 50 % acetonitrilu / 50 % vody
  • nebo 50 % acetonitrilu / 50 % pufrované vody

Proč je správná výměna rozpouštědel důležitá

Video upozorňuje, že nesprávně provedená výměna rozpouštědel může vést k nevratnému poškození kolony.

Možné problémy zahrnují:

Vznik dutin ve stacionární fázi

Přechod mezi nemísitelnými rozpouštědly může vést ke vzniku dutin ve stacionární fázi nebo na vstupu do kolony.

Tyto defekty mohou trvale ovlivnit chromatografický výkon.

Vysrážení solí

Pokud jsou používány pufrované mobilní fáze a přechod není proveden přes vhodná čistá rozpouštědla, může dojít k vysrážení solí.

Poškození tlakově citlivých polymerních materiálů

Tlakově citlivé polymerní materiály mohou při nevhodné změně rozpouštědel prasknout.

Odstranění potahu stacionární fáze

U některých kolon může nevhodná výměna rozpouštědel vést k odstranění potahu stacionární fáze nebo ligandů.

Nevratnost poškození

Ve videu je zdůrazněno, že poškození způsobené použitím nemísitelných rozpouštědel je velmi obtížné, případně nemožné odstranit.

Proto je důležité při přechodu mezi nemísitelnými rozpouštědly dodržovat správný postup výměny rozpouštědel.

Závěr

Úspěšná výměna rozpouštědel začíná zjištěním, v jakém rozpouštědle byla kolona dodána. Následně je nutné ověřit mísitelnost tohoto rozpouštědla s mobilními fázemi používanými v metodě.

Pokud jsou rozpouštědla nemísitelná, je třeba postupovat tak, aby mezi nimi nedošlo k přímému přechodu. Ve videu je jako vhodný prostředek pro tento přechod uveden isopropanol (IPA).

Dodržení doporučeného postupu proplachu a následné ekvilibrace pomáhá zabránit trvalému poškození kolony a zajistit její bezpečný provoz.