Průvodce řešením problémů v LC/MS - tlak, kontaminace, retenční časy

V dnešním světě analytické chemie je neustálým cílem dosahovat přesných a spolehlivých výsledků. Jedním z klíčových nástrojů, který nám to umožňuje, je kapalinová chromatografie spojená s hmotnostní spektrometrií. Tyto metody umožňují rozdělit a identifikovat složité směsi látek a zkoumat jejich strukturu a vlastnosti.

V naší sérii článků se budeme zabývat technickými a praktickými problémy, které mohou při těchto analýzách vzniknout, a podívame se možná řešení, postupy a doporučení, které je můžou rychle odstranit.

V jednotlivých částech rozebereme následující problémy:

• Žádné píky
• Změny retenčních časů
• Vysoký tlak
• Křížová kontaminace
• Změny MS rozlišení
• Nedostatečná přesnost hmoty (HRAM systémy)
• Nízký tlak
• Změny citlivosti
• Nežádoucí fragmentace

💾 Kompletní příručka v ČJ ke stažení

1. Díl: Průvodce řešením problémů v LC/MS - základní kroky

Nízký tlak, Vysoký tlak, Křížová kontaminace, Změny retenčních časů

1. Nízký tlak

Částečná netěsnost v systému

• Zkontrolujte všechny spojení a utáhněte netěsná místa.

Průtok

• Zkontrolujte, zda je v metodě správně nastavený průtok.
• Zkontrolujte přesnost zobrazovaného průtoku pomocí kalibrovaného zařízení nebo změřte čas, za který proteče systémem předem specifikovaný objem mobilní fáze.
• Vyměňte opotřebovaná nebo poškozená těsnění.

Metoda

• Zkontrolujte, zda je v metodě nastavená správná teplota a rozpouštědla.
• Pokud je v systému zabudován ventil pro přepínání mezi kolonami, zkontrolujte výběr správné kolony.

Nesprávná kolona

• Použijte správnou kolonu s vyhovujícími rozměry a velikostí částic.

Příliš vysoká teplota kolony

• Nastavte správnou teplotu a zkontrolujte, jestli nebyla kolona poškozena, pokud byl překročen její teplotní limit.

Přítomnost vzduchové bubliny

• Proveďte proplach systému.

Nefunkční „check valves“

• Propláchněte LC systém isopropanolem a zkontrolujte funkčnost systému
• Dejte „check valve“ do ultrazvukové lázně.-

Porucha senzoru

• Opravte nebo vyměňte tlakový senzor.

Shimadzu: Shimadzu LCMS-8060NX

2. Vysoký tlak

Příliš vysoký průtok

• Snižte průtok.

Ucpaná kolona

• Proveďte zpětný proplach kolony (pokud je povolen) nebo vyměňte kolonu.

Nekompatibilní mobilní fáze (vysrážený nebo nemísitelný pufr)

• Použijte správnou mobilní fázi; promyjte a reekvilibrujte kolonu.

Špatně zvolená kolona

• Použijte správnou kolonu s vyhovujícími rozměry a velikostí částic.

Ucpaný injektor

• Odstraňte zábranu (kontrola jehly, nástřikové smyčky, sestavy ventilů a výstupu HPV).

Ucpaná předkolona

• Vyměňte nebo odstraňte předkolonu.

Ucpaný kolonový in-line filtr

• Vyměňte nebo odstraňte in-line filtr.

Příliš nízká teplota kolony

• Nastavte správnou teplotu.

Porucha senzoru

• Opravte nebo vyměňte tlakový senzor.

Ucpaný in-line filtr pumpy

• Vyměňte in-line filtr.

Ucpané kapiláry

• Vyměňte ucpané kapiláry podle potřeby

3. Křížová kontaminace

Špatné nastavení oplachu jehly

• Zkontrolujte oplachový roztok a nastavení oplachu jehly v metodě.

Koncentrace vzorku

• Nařeďte vzorky nebo snižte objem nástřiku.

Kontaminace kolony

• Proveďte proplach kolony; vyměňte předkolonu, nebo analytickou kolonu (pokud je nutné).

Problémy s autosamplerem

• Nepřesný objem nástřiku. Ověřte, zda nedochází ke změnám objemu nástřiku pomocí testovací směsi standardů.
• Ověřte, zda je v sekvenci/metodě nastaven správný objem nástřiku.
• Nastavte komplexnější oplachový protokol jehly a nástřikové smyčky pro minimalizaci křížové kontaminace.
• Proveďte proplach pumpy v autosampleru pro odstranění vzduchových bublin.

LC gradient

• Prodlužte dobu eluce pomocí silného rozpouštědla v průběhu gradientu v závislosti na rozměrech kolony.

Shimadzu: Nový inertní UHPLC systém Shimadzu Nexera XS inert

4. Změny retenčních časů

Průtok

• Zkontrolujte, zda je v metodě správně nastavený průtok.

Nedostatečná ekvilibrace

• Propláchněte kolonu množstvím mobilní fáze, které odpovídá alespoň 10 kolonovým objemům (postupujte podle manuálu výrobce).
• Prodlužte čas ekvilibrace mezi jednotlivými nástřiky.

Špatná regulace teploty

• Zajistěte, aby teplota v kolonovém termostatu byla správně nastavena.

Změna rozměrů kolony

• Ujistěte se, že je použita správná kolona včetně rozměrů.

Změna stacionární fáze

• Nepoužívejte kolonu s iontově párovými činidly s jinými mobilními fázemi kvůli paměťovému efektu.
• Hydrofobní kolaps stacionární fáze.

Nesprávná mobilní fáze

• Zajistěte, aby mobilní fáze byla připravena správně a v metodě byly zvoleny správné cesty pro průchod mobilní fáze.
• Pokud používáte čerpadlo k směšování mobilní fáze, ověřte, že dávkování je přesné.

Netěsnosti

• Zkontrolujte, zda v systému nejsou uvolněné spoje.

Vzduchová bublina v pumpě

• Odstraňte vzduchové bubliny z pumpy pomocí odvzdušňovacího ventilu.

Rozpouštědlo pro ředění vzorku

• Nevhodné rozpouštědlo pro ředění vzorků pro použitou chromatografickou kolonu.

Oplach jehly

• Rozpouštědlo pro oplach jehly se dostalo na kolonu.

Nevhodné

• Pro overeni proveďte proplach LC systému isopropanolem.