Role end-cappingu v HPLC na reverzní fázi

Silikagel používaný jako náplň HPLC kolon je polymerem křemíku a kyslíku se skupinami Si–OH (silanoly) na povrchu. Na tyto silanolové skupiny se vážou funkční skupiny pomocí silanového činidla, čímž se základní médium funkcionalizuje.

Při funkcionalizaci HPLC kolon není možné zajistit 100% pokrytí fáze a reagovat se všemi dostupnými silanolovými skupinami (volné hydroxylové skupiny na povrchu silikagelu). S postupující vazbou fáze se zvyšuje sterické bránění, což ztěžuje následné vazby.

Bez end-cappingu by kolona zůstala s velkým množstvím přístupných, vysoce aktivních zbytkových silanolů, které mohou měnit selektivitu stacionární fáze. Tyto skupiny mohou vytvářet silné iontové a polární interakce („sekundární interakce“) s polárními a bazickými funkčními skupinami analytů. Proto je snížení počtu volných silanolových skupin po navázání stacionární fáze pomocí end-cappingu nezbytné.

Phenomenex: TMS endcapping

Historicky se end-capping prováděl malými hydrofobními skupinami, podobnými trimethylsilylu. V posledních letech však výrobci začali používat i jiné funkční skupiny, které přidávají další selektivní prvek.

Phenomenex: C18 polární endcapping

Funkční skupiny a jejich vliv na vlastnosti kolony

C18 – Standardní trimethylsilylový end-capping

Typ end-cappingu: trimethylsilylová skupina
Hlavní výhody:

• Minimalizuje přítomnost aktivních silanolových skupin.
• Zajišťuje stabilní a reprodukovatelné retence u široké škály neutrálních a nepolárních látek.

PS-C18 – Pozitivně nabitá skupina s trimethylsilylem

Typ end-cappingu: pozitivně nabitá skupina + trimethylsilyl
Hlavní výhody:

• Kombinuje iontově-výměnné a hydrofobní interakce.
• Výborný tvar píků pro bazické analyty.
• Snižuje potřebu složitých mobilních fází nebo ion-pair činidel.
• Stabilní ve 100% vodném prostředí.

Polar C18 – Polární skupina s trimethylsilylem

Typ end-cappingu: polární skupina + trimethylsilyl
Hlavní výhody:

• Poskytuje polární i hydrofobní selektivitu.
• Zvyšuje retenci a rozlišení polárních analytů.
• Snižuje potřebu složitých mobilních fází.
• Stabilita ve 100% vodném prostředí.

XB-C18 – Stericky chráněná fáze

Typ end-cappingu: diisobutylové postranní řetězce + trimethylsilyl
Hlavní výhody:

• Sterické bránění minimalizuje interakce se zbytkovými silanoly.
• Zlepšený tvar píků pro bazické látky.
• Zvýšená retence kyselých analytů.

Shrnutí

Moderní technologie end-cappingu výrazně zlepšují analýzu látek, které byly dříve problematické. Například při analýze bazických léčiv lze pomocí kolon PS-C18 dosáhnout skvělého tvaru píků a kratších retenčních časů. Chemie Polar C18 poskytuje nejlepší retenci pro metabolity a XB-C18 vykazuje výborné výsledky při analýze peptidů, včetně malých polárních fragmentů.

Řešení problémů s LC

• Problémy s chromatogramem a nástřikovým zařízením
• Hlavní problémové oblasti a preventivní údržba
• Úniky a abnormální tlak

Stáhnout průvodce řešením problémů s HPLC