HPLC kolony pro polární analyty (VIZE 2021) | LabRulez LCMS

HPLC kolony pro polární analyty (VIZE 2021)

St, 9.11.2022
| Originální článek z: Waters/VIZE 2021
Záznam přednášky Dr. Martiny Riesové ze semináře Waters VIZE 2021 o principech, možnostech a aplikacích HPLC kolon pro polární analyty.
Video placeholder

Waters Corporation: HPLC kolony pro polární analyty (VIZE 2021)

👉 Pozvánka, registrace a předběžný program semináře Waters VIZE 2022 dne 22. listopadu 2022

Agenda

  • Polar molecules
  • Chromatographic techniques used to retain/separate polar molecules
  • Reversed phase: What works and what doesn’t
  • Mixed Mode: Overview, Retaining polar acidic molecules
  • HILIC

Náplň příspěvku bude upravena dle dotazníkového šetření

Nyní bych si dal/dala: (11:50 am)
  1. Oběd
  2. Pivo
  3. Povídání o Waters kolonách

Waters Corporation: Dotazníkové šetření HPLC kolony Waters

Vím už, co je MaxPeak HPS Premier technologie?
  1. Vím
  2. Nevím

Waters Corporation: Dotazníkové šetření - Vím už, co je MaxPeak HPS Premier technologie?

Pro své polární analyty bych volil/volila:

1. RP (18%) C18

  • Vhodné parametry kolony
  • Co funguje/nefunguje

2. Mixed mode (23%) C18 & aniontová výměna

  • Polární kyselé látky
  • Nové BEH 95 Å částice

3. HILIC (59%) Z-HILIC kolona

  • Vlastnosti
  • Co umí
Retence polárních látek na RP (C18)

K zadržení polární látky na nepolární stacionární fázi musíme snížit podíl organiky v MF

Waters Corporation: Retence polárních látek na RP (C18)

Vhodná nižší hustota ligandů

Hustota ligandů
  • T3 - 1.6 μmol/m²
  • C18 - 3.2 μmol/m²

Waters Corporation: Hustota ligandů C18 fáze

Vložená polární skupina

  • Kompatibilní se 100% vodnou fází
  • Vytvoří se vrstvička vody, která odstíní silanolové skupiny
  • Navrženy pro zlepšení tvaru píků bazických látek
  • Ligandy navázány hustě

  • Shield RP18

Waters Corporation: Vložená polární skupina u Shield RP18 HPLC kolon

Vícemodální stacionární fáze

  • polární látky kyseliny
  • C18 a kladný náboj
Důležité
  • Vybalancovat příspěvky jednotlivých módů, reprodukovatelnost
  • MS kompatibilita bleeding IEX skupiny ovlivnění MS signálu
  • pH rozmezí (silikagel vs BEH)

Waters Corporation: Vícemodální stacionární fáze HPLC kolon Waters

Atlantis Premier BEH C18 AX

  • BEH částice 95Å (větší retentivita)
  • 100% vodná fáze / MS kompatibilní

Waters Corporation - HPLC kolony Atlantis Premier BEH C18 AX.jpg

Waters Corporation: Ukázky analýz HPLC kolon Atlantis Premier BEH C18 AX, ACQUITY UPLC CSH C18 a ACQUITY UPLC HSS T3

Vícemodální retenční mechanismus: HILIC

Rozdělovací rovnováha

Polární analyty přecházejí mezi mobilní fází a polární vodnou vrstvou znehybněnou na povrchu sorbentu

Iontová výměna

Elektrostatické interakce mezi povrchovými silanoly a/nebo funkčními skupinami s nabitým analytem

Vodíková vazby

Waters Corporation: Vícemodální retenční mechanismus - HILIC

HILIC stacionární fáze

Waters Corporation: HILIC stacionární fáze

Atlantis Premier BEH 95Å Z-HILIC

  • Stabilita v bazickém pH
    • Silika 2-8, polymerní částice 2-10, BEH 2-10
  • Nízká výtěžnost analytů citlivých na kov
    • PEEK, MaxPeak HPS
  • Batch-to-Batch reprodukovatelnost, vázání ligandů

Waters Corporation: Atlantis Premier BEH 95Å Z-HILIC

BEH 95Å částice
  • pH i mechanická stabilita (2 - 10; 18 tis. psi)
  • větší retentivita oproti BEH 130 Å částicím
  • 1.7 µm, 2.5 µm, 5 µm
Sulfobetainový ligand
  • Pozitivní i negativní náboj 1:1
  • Celkově neutrální a velmi hydrofilní povrch
  • Vytváří “silnou” vodnou vrstvu na povrchu
  • Zvýšení retence neutrálních polárních látek vs amidové a “HILIC
  • Alternativní selektivita
MaxPeak HPS
  • lepší výtěžnost, tvary píků a citlivost díky minimalizaci interakcí kov analyt
VanGuard FIT formát
  • Zabudovaný držák na ochranné cartridge
  • Formáty FIT nebo “column“

Z-HILIC vs HILIC vs Amide

  • Atlantis Premier BEH Z-HILIC
  • ACQUITY Premier BEH Amide
  • ACQUITY BEH HILIC

Waters Corporation: Z-HILIC vs HILIC vs Amide

Waters Corporation: Z-HILIC vs HILIC vs Amide

Metabolomika

Pentózofosfátový cyklus, Glykolýza and Energetické Metabolity

  • Cílená UPLC/MS/MS metoda pro 27 metabolitů, separace isobarických látek, ostré a symetrické píky
  • Optimální pH 9 – BEH částice
  • MaxPeak High Performance Surfaces technology

Aplikační nóta 720007411: Separation of Pentose Phosphate Pathway, Glycolysis, and Energy Metabolites Using an ACQUITY Premier System With an Atlantis Premier BEH Z-HILIC Column

Waters Corporation: Z-HILIC Metabolomika (Pentózofosfátový cyklus, Glykolýza and Energetické Metabolity)

BioPharma

Separace RNA nukleotidů, nukleosidů a nukleových bazí

  • Vylepšená separace 13 biologicky relevantních a strukturně podobných RNA komponent
  • MaxPeak High Performance Surface poskytuje lepší tvary píků fosforylovaných nukleotidů
  • Rychlá analýza

Aplikační nóta 720007324: Improved Separation of RNA Nucleotides, Nucleosides, and Nucleobases on Atlantis Premier BEH Z-HILIC Columns

Waters Corporation: Z-HILIC BioPharma (Separace RNA nukleotidů, nukleosidů a nukleových bazí)

Waters Corporation
Další projekty
Sledujte nás
Další informace
WebinářeO násKontaktujte násPodmínky užití

LabRulez s.r.o. Všechna práva vyhrazena.