HPLC kolony pro polární analyty (VIZE 2021)

👉 Pozvánka, registrace a předběžný program semináře Waters VIZE 2022 dne 22. listopadu 2022

Agenda

• Polar molecules
• Chromatographic techniques used to retain/separate polar molecules
• Reversed phase: What works and what doesn’t
• Mixed Mode: Overview, Retaining polar acidic molecules
• HILIC

Náplň příspěvku bude upravena dle dotazníkového šetření

Nyní bych si dal/dala: (11:50 am)

1. Oběd
2. Pivo
3. Povídání o Waters kolonách

Waters Corporation: Dotazníkové šetření HPLC kolony Waters

Vím už, co je MaxPeak HPS Premier technologie?

1. Vím
2. Nevím

Waters Corporation: Dotazníkové šetření - Vím už, co je MaxPeak HPS Premier technologie?

Pro své polární analyty bych volil/volila:

1. RP (18%) C18

• Vhodné parametry kolony
• Co funguje/nefunguje

2. Mixed mode (23%) C18 & aniontová výměna

• Polární kyselé látky
• Nové BEH 95 Å částice

3. HILIC (59%) Z-HILIC kolona

• Vlastnosti
• Co umí

Retence polárních látek na RP (C18)

K zadržení polární látky na nepolární stacionární fázi musíme snížit podíl organiky v MF

Waters Corporation: Retence polárních látek na RP (C18)

Vhodná nižší hustota ligandů

• Atlantis (T3)
• Acquity HSS (T3)
• XSelect HSS (T3)
• Cortecs (T3)

Hustota ligandů

• T3 - 1.6 μmol/m²
• C18 - 3.2 μmol/m²

Waters Corporation: Hustota ligandů C18 fáze

Vložená polární skupina

• Kompatibilní se 100% vodnou fází

• Vytvoří se vrstvička vody, která odstíní silanolové skupiny

• Navrženy pro zlepšení tvaru píků bazických látek

• Ligandy navázány hustě

• Shield RP18

Waters Corporation: Vložená polární skupina u Shield RP18 HPLC kolon

Vícemodální stacionární fáze

• polární látky kyseliny
• C18 a kladný náboj

Důležité

• Vybalancovat příspěvky jednotlivých módů, reprodukovatelnost
• MS kompatibilita bleeding IEX skupiny ovlivnění MS signálu
• pH rozmezí (silikagel vs BEH)

Waters Corporation: Vícemodální stacionární fáze HPLC kolon Waters

Atlantis Premier BEH C18 AX

• BEH částice 95Å (větší retentivita)
• 100% vodná fáze / MS kompatibilní

Waters Corporation - HPLC kolony Atlantis Premier BEH C18 AX.jpg

Waters Corporation: Ukázky analýz HPLC kolon Atlantis Premier BEH C18 AX, ACQUITY UPLC CSH C18 a ACQUITY UPLC HSS T3

Vícemodální retenční mechanismus: HILIC

Rozdělovací rovnováha

Polární analyty přecházejí mezi mobilní fází a polární vodnou vrstvou znehybněnou na povrchu sorbentu

Iontová výměna

Elektrostatické interakce mezi povrchovými silanoly a/nebo funkčními skupinami s nabitým analytem

Vodíková vazby

Waters Corporation: Vícemodální retenční mechanismus - HILIC

HILIC stacionární fáze

Waters Corporation: HILIC stacionární fáze

Atlantis Premier BEH 95Å Z-HILIC

• Stabilita v bazickém pH
  • Silika 2-8, polymerní částice 2-10, BEH 2-10
• Nízká výtěžnost analytů citlivých na kov
  • PEEK, MaxPeak HPS
• Batch-to-Batch reprodukovatelnost, vázání ligandů

Waters Corporation: Atlantis Premier BEH 95Å Z-HILIC

BEH 95Å částice

• pH i mechanická stabilita (2 - 10; 18 tis. psi)
• větší retentivita oproti BEH 130 Å částicím
• 1.7 µm, 2.5 µm, 5 µm

Sulfobetainový ligand

• Pozitivní i negativní náboj 1:1
• Celkově neutrální a velmi hydrofilní povrch
• Vytváří “silnou” vodnou vrstvu na povrchu
• Zvýšení retence neutrálních polárních látek vs amidové a “HILIC
• Alternativní selektivita

MaxPeak HPS

• lepší výtěžnost, tvary píků a citlivost díky minimalizaci interakcí kov analyt

VanGuard FIT formát

• Zabudovaný držák na ochranné cartridge
• Formáty FIT nebo “column“

Z-HILIC vs HILIC vs Amide

• Atlantis Premier BEH Z-HILIC
• ACQUITY Premier BEH Amide
• ACQUITY BEH HILIC

Waters Corporation: Z-HILIC vs HILIC vs Amide

Waters Corporation: Z-HILIC vs HILIC vs Amide

Metabolomika

Pentózofosfátový cyklus, Glykolýza and Energetické Metabolity

• Cílená UPLC/MS/MS metoda pro 27 metabolitů, separace isobarických látek, ostré a symetrické píky
• Optimální pH 9 – BEH částice
• MaxPeak High Performance Surfaces technology

Aplikační nóta 720007411: Separation of Pentose Phosphate Pathway, Glycolysis, and Energy Metabolites Using an ACQUITY Premier System With an Atlantis Premier BEH Z-HILIC Column

Waters Corporation: Z-HILIC Metabolomika (Pentózofosfátový cyklus, Glykolýza and Energetické Metabolity)

BioPharma

Separace RNA nukleotidů, nukleosidů a nukleových bazí

• Vylepšená separace 13 biologicky relevantních a strukturně podobných RNA komponent
• MaxPeak High Performance Surface poskytuje lepší tvary píků fosforylovaných nukleotidů
• Rychlá analýza

Aplikační nóta 720007324: Improved Separation of RNA Nucleotides, Nucleosides, and Nucleobases on Atlantis Premier BEH Z-HILIC Columns

Waters Corporation: Z-HILIC BioPharma (Separace RNA nukleotidů, nukleosidů a nukleových bazí)