HPLC kolony pro polární analyty (VIZE 2021)
Waters Corporation: HPLC kolony pro polární analyty (VIZE 2021)
👉 Pozvánka, registrace a předběžný program semináře Waters VIZE 2022 dne 22. listopadu 2022
Agenda
- Polar molecules
- Chromatographic techniques used to retain/separate polar molecules
- Reversed phase: What works and what doesn’t
- Mixed Mode: Overview, Retaining polar acidic molecules
- HILIC
Náplň příspěvku bude upravena dle dotazníkového šetření
Nyní bych si dal/dala: (11:50 am)
- Oběd
- Pivo
- Povídání o Waters kolonách
Waters Corporation: Dotazníkové šetření HPLC kolony Waters
Vím už, co je MaxPeak HPS Premier technologie?
- Vím
- Nevím
Waters Corporation: Dotazníkové šetření - Vím už, co je MaxPeak HPS Premier technologie?
Pro své polární analyty bych volil/volila:
1. RP (18%) C18
- Vhodné parametry kolony
- Co funguje/nefunguje
2. Mixed mode (23%) C18 & aniontová výměna
- Polární kyselé látky
- Nové BEH 95 Å částice
3. HILIC (59%) Z-HILIC kolona
- Vlastnosti
- Co umí
Retence polárních látek na RP (C18)
K zadržení polární látky na nepolární stacionární fázi musíme snížit podíl organiky v MF
Waters Corporation: Retence polárních látek na RP (C18)
Vhodná nižší hustota ligandů
Hustota ligandů
- T3 - 1.6 μmol/m²
- C18 - 3.2 μmol/m²
Waters Corporation: Hustota ligandů C18 fáze
Vložená polární skupina
- Kompatibilní se 100% vodnou fází
- Vytvoří se vrstvička vody, která odstíní silanolové skupiny
- Navrženy pro zlepšení tvaru píků bazických látek
Ligandy navázány hustě
Shield RP18
Waters Corporation: Vložená polární skupina u Shield RP18 HPLC kolon
Vícemodální stacionární fáze
- polární látky kyseliny
- C18 a kladný náboj
Důležité
- Vybalancovat příspěvky jednotlivých módů, reprodukovatelnost
- MS kompatibilita bleeding IEX skupiny ovlivnění MS signálu
- pH rozmezí (silikagel vs BEH)
Waters Corporation: Vícemodální stacionární fáze HPLC kolon Waters
Atlantis Premier BEH C18 AX
- BEH částice 95Å (větší retentivita)
- 100% vodná fáze / MS kompatibilní
Waters Corporation - HPLC kolony Atlantis Premier BEH C18 AX.jpg
Waters Corporation: Ukázky analýz HPLC kolon Atlantis Premier BEH C18 AX, ACQUITY UPLC CSH C18 a ACQUITY UPLC HSS T3
Vícemodální retenční mechanismus: HILIC
Rozdělovací rovnováha
Polární analyty přecházejí mezi mobilní fází a polární vodnou vrstvou znehybněnou na povrchu sorbentu
Iontová výměna
Elektrostatické interakce mezi povrchovými silanoly a/nebo funkčními skupinami s nabitým analytem
Vodíková vazby
Waters Corporation: Vícemodální retenční mechanismus - HILIC
HILIC stacionární fáze
Waters Corporation: HILIC stacionární fáze
Atlantis Premier BEH 95Å Z-HILIC
- Stabilita v bazickém pH
- Silika 2-8, polymerní částice 2-10, BEH 2-10
- Nízká výtěžnost analytů citlivých na kov
- PEEK, MaxPeak HPS
- Batch-to-Batch reprodukovatelnost, vázání ligandů
Waters Corporation: Atlantis Premier BEH 95Å Z-HILIC
BEH 95Å částice
- pH i mechanická stabilita (2 - 10; 18 tis. psi)
- větší retentivita oproti BEH 130 Å částicím
- 1.7 µm, 2.5 µm, 5 µm
Sulfobetainový ligand
- Pozitivní i negativní náboj 1:1
- Celkově neutrální a velmi hydrofilní povrch
- Vytváří “silnou” vodnou vrstvu na povrchu
- Zvýšení retence neutrálních polárních látek vs amidové a “HILIC
- Alternativní selektivita
MaxPeak HPS
- lepší výtěžnost, tvary píků a citlivost díky minimalizaci interakcí kov analyt
VanGuard FIT formát
- Zabudovaný držák na ochranné cartridge
- Formáty FIT nebo “column“
Z-HILIC vs HILIC vs Amide
- Atlantis Premier BEH Z-HILIC
- ACQUITY Premier BEH Amide
- ACQUITY BEH HILIC
Waters Corporation: Z-HILIC vs HILIC vs Amide
Waters Corporation: Z-HILIC vs HILIC vs Amide
Metabolomika
Pentózofosfátový cyklus, Glykolýza and Energetické Metabolity
- Cílená UPLC/MS/MS metoda pro 27 metabolitů, separace isobarických látek, ostré a symetrické píky
- Optimální pH 9 – BEH částice
- MaxPeak High Performance Surfaces technology
Aplikační nóta 720007411: Separation of Pentose Phosphate Pathway, Glycolysis, and Energy Metabolites Using an ACQUITY Premier System With an Atlantis Premier BEH Z-HILIC Column
Waters Corporation: Z-HILIC Metabolomika (Pentózofosfátový cyklus, Glykolýza and Energetické Metabolity)
BioPharma
Separace RNA nukleotidů, nukleosidů a nukleových bazí
- Vylepšená separace 13 biologicky relevantních a strukturně podobných RNA komponent
- MaxPeak High Performance Surface poskytuje lepší tvary píků fosforylovaných nukleotidů
- Rychlá analýza
Aplikační nóta 720007324: Improved Separation of RNA Nucleotides, Nucleosides, and Nucleobases on Atlantis Premier BEH Z-HILIC Columns
Waters Corporation: Z-HILIC BioPharma (Separace RNA nukleotidů, nukleosidů a nukleových bazí)
