Při použití metody SPE dosahuji nízké výtěžnosti, jak mohu tento problém vyřešit?
St, 17.9.2025
| Originální článek z: Phenomenex
Phenomenex: Při použití metody SPE dosahuji nízké výtěžnosti, jak mohu tento problém vyřešit?
Pokud pracujete s již zavedenou metodou, doporučujeme:
- Zkontrolovat všechny roztoky používané pro SPE, abyste se ujistili, že nejsou prošlé nebo nesprávně označené.
- Prověřit postup. Nebyl průtok během nanášení vzorku nebo eluce příliš rychlý? Nemohly cartridge mezi ekvilibrací a nanesením vzorku vyschnout?
Obvykle je nejrychlejším řešením jednoduše zopakovat extrakci s ohledem na tyto body.
Pokud však vyvíjíte novou metodu, může být nutné „vystopovat“ analyt. Nejprve doporučujeme připravit roztok analytu bez vzorkové matrice (jako ideální kontrolní vzorek). Poté proveďte jednotlivé kroky metody a zachyťte eluát z každého kroku, který by mohl analyt obsahovat:
- Kondicionujte cartridge.
- Ekvilibrujte cartridge.
- Naneste vzorek a zachyťte průtokovou frakci do vialky.
- Analyzujte tuto frakci na přítomnost analytu. Pokud se v ní analyt objeví, může to znamenat:
- rozpouštědlo je příliš silné nebo má nevhodné pH,
- rychlost průtoku je příliš vysoká,
- dochází k průniku analytu sorbentem (breakthrough), protože množství vzorku je příliš velké nebo hmotnost sorbentu příliš malá.
- Promyjte cartridge eluentem a každou promývací frakci zachyťte do samostatné vialky.
- Opět analyzujte obsah analytu. Pokud se analyt objeví v některé z promývacích frakcí, znamená to:
- promývací eluent je příliš silný,
- promývací eluent nemá vhodné pH.
- Pokud se analyt nenajde ani v průtokové, ani v promývacích frakcích, pak musí být zadržen na cartridgi. V takovém případě:
- zkuste použít silnější eluent pro eluci (eluční rozpouštědlo),
- ověřte správné pH elučního eluenta,
- pokud první dvě doporučení nepomohou, použijte sorbent s nižší retencí (v reverzní fázi lze například vyměnit C18 za C8, pokud jsou analyty velmi hydrofobní).
Phenomenex
