Kontaminace kolony – co se děje a jak tomu lze zabránit

Jednou z nejčastějších příčin krátké životnosti kolony je její kontaminace, která často vede k vysokému protitlaku a takzvanému „ucpání“ vstupní frity.

Tento technický tip má za cíl vysvětlit, co se při tom děje, a také jak lze kontaminaci kolony předcházet.

Při výrobě HPLC a UHPLC kolon plněných částicemi se používají frity, které zabraňují vniknutí cizorodých látek do kolony a zároveň brání ztrátě stacionární fáze. Tyto frity jsou porézní kovové disky s velikostí pórů obvykle 0,5, 1,0 nebo 2,0 μm. Pokud vzorky obsahují nerozpuštěný materiál, zachytí se na vnější straně vstupní frity. Jak tento proces pokračuje, průtočná plocha frity se zmenšuje, což omezuje průtok mobilní fáze a tím dochází ke zvýšení protitlaku. Nakonec se stane nemožné protlačit rozpouštědlo fritou a HPLC čerpadlo se zastaví.

Tomu lze předejít filtrací vzorků před vstřikováním do HPLC systému. Obecně se doporučuje používat stříkačkové filtry s porézností 0,45 μm pro vzorky analyzované na 5μm kolonách a 0,2 μm filtry pro 3μm kolony a menší. Je třeba dbát na to, aby rozpouštědlo vzorku ideálně odpovídalo mobilní fázi. Pokud tomu tak není, mohou být některé složky vzorku rozpustné v rozpouštědle a projdou tak filtrem. Při vstřiku do mobilní fáze se však mohou vysrážet a ucpat fritu. Tomu lze zabránit buď rozpuštěním vzorku přímo v mobilní fázi, nebo instalací vstupní frity či předkolony jako obětního prvku, který zabrání znečištění samotného vstupu kolony.

Alternativně můžete využít i náš webový nástroj, který vás provede výběrem vhodné předkolony.