Přenos metody z kvartérního LC systému Agilent 1100 na Agilent 1260 Infinity III LC

Přenos metod je důležitým tématem pro všechny laboratoře v různých průmyslových odvětvích, kde se metody HPLC přenášejí mezi odděleními a pracovišti i mezi různými LC přístroji.¹ Pro validované metody ve farmaceutickém průmyslu je přenositelnost metod povinná. Přenos metod neboli přenos analytických postupů z jedné laboratoře do druhé ve farmaceutickém průmyslu vyžaduje dokumentovaný proces, který vyžaduje srovnávací testování.² Jedním z příkladů přenosu metod mezi přístroji je přenos konvenčních LC metod ze starších zařízení na nové přístroje, jako je například LC 1260 Infinity III. 

Tento technický přehled demonstruje přenos metody z kvartérního LC řady 1100 na LC 1260 Infinity III pro konvenční LC metody. Bylo vybráno několik metod, které pokrývají různé gradientové podmínky včetně náročných podmínek, jako je mělký gradient a gradient začínající na extrémní hodnotě složení. To by mělo prokázat, že při přenosu metod ze širokého aplikačního prostoru konvenčních LC metod z kvartérní LC řady 1100 na LC 1260 Infinity III se dosahuje rovnocenných výsledků.

Experimentální vybavení 

LC systém Agilent řady 1100 se skládá z následujících modulů:  

• Kvartérní čerpadlo Agilent řady 1100 (G1311A) s aktivním vstupním ventilem (AIV)
• Odplyňovač Agilent řady 1100 (G1322A)
• Standardní autosampler Agilent řady 1100 (G1313A)
• Agilent 1100 Series s termostatovaným oddílem kolony (G1316A)
• Detektor s diodovým polem Agilent řady 1100 (G1315B) se standardní průtokovou kyvetou, 10 mm, (G1315-60022)

LC systém Agilent 1260 Infinity III se skládá z následujících modulů:

• Agilent 1260 Infinity III kvartérní čerpadlo (G7111B) s aktivním vstupním ventilem (AIV) 
• Agilent 1260 Infinity III vialsampler (G7129C) 
• Agilent 1260 Infinity III vícekolonový termostat (G7116A) 
• Agilent 1260 Infinity III detektor s diodovým polem WR (G7115A) se standardní průtokovou kyvetou, 10 mm, (G1315-60022).

Altium International: Agilent 1260 Infinity III LC System

Software 

• Agilent OpenLab CDS, verze 2.7. 

Kolony 

• Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, 4,6 × 150 mm, 5 µm (číslo dílu 959993-902)
• Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, 4,6 × 50 mm, 3,5 µm (číslo dílu 959943-902)
• Agilent ZORBAX SB-C18, 4,6 × 150 mm, 5 µm (číslo dílu 883975-902)

Příprava vzorku purinových alkaloidů

Vzorek obsahující po 100 µg/ml kofeinu, theobrominu a theofylinu ve vodě a acetonitrilu (98:2; v/v) byl připraven následujícím způsobem: Do 25 ml odměrné baňky bylo naváženo po 25 mg kofeinu, theobrominu a theofylinu. Poté bylo přidáno 5 ml acetonitrilu a 15 ml vody a standardy byly rozpuštěny sonikací. Vzorek byl doplněn vodou na požadovaný objem. Poté byl 1 ml výsledného vzorku o koncentraci 1 mg/ml zředěn vodou na 10 ml. Vzorek byl filtrován pomocí stříkačkového filtru Agilent Captiva Premium, regenerovaná celulóza, 0,2 µm (číslo dílu 5190-5310).

Výsledky a diskuse 

Aby se prokázalo, že při převodu konvenčních LC metod z LC řady 1100 na LC 1260 Infinity III lze dosáhnout rovnocenných výsledků, byly zkoumány metody zahrnující různé gradientové podmínky (viz tabulky 1 až 4). 

Altium: Metoda pro izokratickou analýzu

Pro izokratickou analýzu jsou výsledky získané při použití LC 1260 Infinity III a LC 1100 uvedeny na obrázku 1. 

Altium: Obrázek 1. Analýza izokratického vzorku metodou izokratické analýzy (tabulka 1) při teplotě kolony 40 °C. N = 10 pro výpočet RSD

Je pozorována vynikající přesnost retenčního času a maximální odchylka retenčního času mezi oběma LC systémy je 0,5 %. Kromě toho jsou retenční časy a jejich reprodukovatelnost srovnatelné při použití kanálů čerpadla A a B nebo C a D pro analýzu (údaje nejsou uvedeny).

Altium: Obrázek 2. Vynikající přesnost retenčního času a minimální odchylka retenčního času mezi oběma LC systémy

Závěr 

Přenos konvenčních LC metod pokrývajících různé gradientové podmínky z kvartérního LC Agilent řady 1100 na LC Agilent 1260 Infinity III vede k ekvivalentním výsledkům, což dokazuje, že u typických robustních konvenčních LC metod lze očekávat bezproblémový přenos metod. Pokud jde o přesnost retenčního času, LC 1260 Infinity III překonává LC 1100, což vede k větší důvěře v data.