LABOREXPO 2022: Průmyslová preparativní chromatografie

Preparativní chromatografie

Mihulka: Preparativní chromatografie

• Organická syntéza

• 50 – 100 násobek Silikagelu

• Desítky frakcí

• Izolace nečistot

• Komerční systémy

• Biochromatografie

💡 PDF přednáška: Průmyslová preparativní chromatografie

Námelové alkaloidy

Mihulka: Námelové alkaloidy

• Surový Ergocristin 3 – 5 % Ergotaminu
• Chromatografie na 3 dílech silikagelu
• Mobilní fáze: CH₂Cl₂₃ – Ether 1 : 1

Jiné aplikace

• Odbarvení reakční směsi

Cyclosporin

Krystalizace versus Chromatografie

• Nečistoty odstranitelné krystalizací
• Nečistoty odstranitelné chromatografií
• Kritická nečistota – neodstranitelná

Mihulka: Cyclosporin - nečistoty

Chromatografie cyclosporinu

• 12 – 15 násobek silikagelu
• Mobilní fáze: Ethylacetát
• 9 m3 Mobilní fáze

Mihulka: Chromatografie cyclosporinu

Chromatografie cyclosporinu

Stará kolona

• 10 bar

• 250 kg silicagel drcený

• 40 - 60µm

• Ethylacetát

• 65 °C

• Nástřik: 12 – 15 kg

• Surový CS

• Detektor

• Stovky cyklů

Mihulka: Stará kolona (zleva) a nová kolona Separlab (zprava)

Nová kolona Separlab

• 60 bar

• Axiální komprese

• 220 kg silicagel

• Sférický 15µm

• Ethylacetát

• 65 °C

Mihulka: Separlab - Závislost koncentrace na objemu

Mihulka: Separlab

Novartis column Ireland

• ID/1600 mm
• Bed Hight/4000 mm
• Bed Volume/8 m3
• Pressure/50 bar

Mihulka: Novartis

• CPC Centrifugal Partition Chromatography

• LL-CCC Liquid-Liquid Counter Current Chromatography

Paclitaxel

• Jehličí Taxus canadensis
• 0,03 % PAC 0,08 % DHB
• Extrakt 0,1 % PAC 0,25 % DHB

Extrakce pevnou fází

• Koncentrát 1 % PAC a 2,5 % DHB

Mihulka: Paclitaxel

• Koncentrát č.1 1 % PAC a 2,5 % DHB v Toluenu

Chromatografie 1

• 250 kg silicagel

• Toluen s gradientem acetonu

• 100 kg sušiny

• Koncentrát č.2 6 % PAC a 15 % DHB

Chromatografie 2

• 200 kg Polyamidu

• Toluen s gradientem acetonu

• Koncentrát č. 3 25 % PAC

• Koncentrát č. 4 50 % DHB

Krystalizace

Surový paclitaxel, cca 75 %

• Kolona 400 x 1000 mm
• 60 kg sférický silikagel, 15 µm
• Mobilní fáze
• Toluen – MIBK 60 : 40
• Nástřik 1 kg Surový paclitaxel

Mihulka: Surový paclitaxel, cca 75 % (nahoře) Paclitaxel USP 99,8 % (dole)

TACROLIMUS

Mihulka: Tacrolimus

Tacrolimus

• R = -CH₂-CH=CH₂

Ascomycin

• R = -CH₂-CH₃

Dihydrotacrolimus

• R = -CH₂-CH₂-CH₃

Mikulka: Tacrolimus Graf

• Kolona: 150 x 1500 mm
• 8 kg CN-Silikagel + 10 % AgNO₃
• Nástřik: 200 g SurTC
• Mobilní fáze: Aceton – Hexan 4 : 6
• Sycení AgNO₃

Zachytávání AgNO₃

Reversní chromatografie

• Kyselina obeticholová

Postup 1:

• Chromatografie na silikagelu
• Toluen a gradient Acetonu
• Krystalizace z Toluenu

Patentová ochrana polymorfie

Postup 2

• Chromatografie na silikagelu
• Toluen a gradient Acetonu
• Chromatografie na reversní fázi
• Voda a Acetonitril