8 bodů jak správně pečovat o HPLC kolony

HPLC kolony jsou klíčovou komponentou chromatografického systému pro účinnou separaci a analýzu složek v širokém spektru aplikací. Životnost každé HPLC kolony je omezená a pro její maximální využití je vhodné jí věnovat odbornou péči, která její dobu používání prodlouží. Doporučuje se pravidelně sledovat účinnost kolony a její separační schopnosti s pomocí standardů. Pokud plánujete skladovat kolonu po delší dobu, použijte mobilní fázi, která inhibuje růst mikroorganismů (mobilní fáze obsahující azid sodný nebo vyšší koncentrace metanolu, acetonitrilu atd.).

Pro dosažení optimálního výkonu a životnosti HPLC kolony dodržujte tato doporučení:

• #1 Pravidelně kontrolujte účinnost kolony.
• #2 Při změně mobilní fáze se vždy ujistěte, jestli jsou obě mobilní fáze dobře mísitelné.
• #3 Vyvarujte se srážení solí v koloně, např. vysokým podílem organické složky v pufru.
• #4 Používejte pouze dokonale filtrované a odplyněné mobilní fáze.
• #5 Nedovolte, aby kolona vyschla. Pokud se nepoužívá, udržujte ji pevně uzavřenou.
• #6 Při dlouhodobém skladování používejte mobilní fázi, která brání růstu bakterií a plísní.
• #7 Kolonu používejte ve směru uvedeném na štítku. Neobvykle vysoký provozní tlak může znamenat ucpanou vstupní fritu a lze jej odstranit obrácením průtoku kolonou na 10-20 ml.
• #8 K odstranění pevných částic nebo nečistot, které se mohou trvale vázat na analytickou kolonu, použijte ochranné předkolonky.

Správná volba kolony, je pro úspěšnou analýzu stejně klíčová jako následná péče o kolony. Společnost Watrex Praha nabízí široké portfolio HPLC kolon, které plní ve vlastní laboratoři.

Typy náplní nabízených HPLC kolon a jejich aplikace

1. Reverzní fáze

Watrex HPLC kolony pro reverzní fázi využívají vysoce kvalitní stacionární fáze na bázi silikagelu, modifikované alkylovými řetězci C18 s účinným endcappingem pro deaktivace (odstínění) reziduálního náboje silanolových skupin. Jsou ideální pro separace mírně polárních až nepolárních sloučenin v široké škále produktů, jako jsou např. složky léčiv, potravinářských produktů a doplňků, environmentálních polutantů či jiné přírodní produkty.

• Rozměry kolon: podle potřeb zákazníka - od standardních analytických kolon (průměr 2,1 - 4,6 mm s délkou typicky 100 mm až 250 mm) plněné přísně monodisperzními částicemi o velikosti 3 anebo 5 um. Součástí nabídky jsou také preparativní kolony vhodné pro separace a purifikaci biolátek (peptidy, aminokyseliny, nukleotidy atd.) s větší porozitou a v provedení semiprep o průměru 8mm a prep o průměru 20 mm.
• Příklady použití: Analýza léčiv, environmentální analýzy, složení potravin.

Watrex: Obrázek 1: Chromatogram 1 - Kolona Watrex IonPlusTM CS19, 200x4mm; Mobile fáze: 4mM HNO3; Průtok: 1.0 ml/min; Detekce: Vodivost bez potlačení. Chromatogram 2: Kolona: Watrex IC Anion I; Mobilní fáze: 4mM Na2CO3 + 1mM NaHCO3 + 0.1mM NaSCN; Průtok: 1,2 ml/min; Tlak: 54 bar; Detekce: Vodivost bez potlačení; Nástřik: 20 μl.

2. Ion-Exchange kolony

Iontově výměnné HPLC kolony od společnosti Watrex jsou určeny pro separaci iontových sloučenin, a to na základě interakce mezi ionty ve stacionární fázi a analyty. Tyto kolony jsou vhodné například pro separaci anorganických iontů, aminokyselin nebo proteinů.

Watrex: Obrázek 2: Chromatogram 3 - Kolona: Watrex Deltasil 100 C18; Mobilní fáze: 85% ACN; Průtok: 0.65 ml/min; Tlak: 54 bar; Detekce: 254 nm; Nástřik: 2 μl.

• Rozměry kolon: kolony s různými rozměry.
• Příklady použití: Analýza iontů, biomolekul, separace peptidů.

3. Ion-Exclusion kolony

Tyto Watrex Polymer IEX HPLC kolony jsou vhodné pro separaci slabých organických kyselin a sacharidů, principem iontové exkluze. Základem jsou polymerní monodisperzní částice o velikosti 8 um modifikované sulfonací a dodávané v různých iontových formách.

• H-forma je určená pro stanovení slabých organických kyselin v potravinách či zemědělských a veterinárních produktech.
• Ca- a Pb-formy jsou typicky používané ke stanovení mono, di a oligosacharidů v potravinářství.

Watrex: Obrázek 3: Chromatogram 4 - Kolona: Watrex Polymer IEX Ca 250x8mm; Eluent: H2O; Průtok: 0.5 ml/min; Tlak: 26 bar; Nástřik: 20 μl; Koncentrace: 20 ppm; Teplota: 90 °C; Detekce: RI. Chromatogram 5 - Kolona: Watrex Polymer IEX H 250x8mm; Eluent: 9mM H2SO4; Průtok: 0.5 ml/min; Tlak: 45 bar; Nástřik: 20 μl; Koncentrace: 20 ppm; Teplota: okolní; Detekce: UV 210 nm.

• Rozměry kolon: průměr 8 mm a délku 250 nebo 300 mm
• Příklady použití: Analýza organických kyselin v potravinářských produktech, fermentační procesy.

4. Kolony pro gelovou chromatografii na principu velikostní exkluze (Gel Permeation/Size exclusion)

Watrex kolony pro gelovou permeační chromatografii (GPC) se používají pro separace vysokomolekulárních látek, typicky syntetických nebo vodorozpustných polymerů, jejíž principem je rozdělení dle velikosti molekul. Menší molekuly pronikají (difundují) hlouběji do porézní struktury sorbentů, a proto vycházejí z kolony později oproti větším molekulám.

Podle typu stacionární fáze se kolony obvykle dělí na kolony pro Gel Permeaition Chromatography (GPC) používané při dělení syntetických polymerů organických mobilních fázích (např. tetrahydrofuran,THF, DMF, toluen THF) na polystyrén - divinylbenzenových sorbentech s definovanou porozitou.

Oproti tomu výrazem Size-Exclusion Chromatography (SEC) se typicky označují kolony pro dělení vodorozpustných polymerů, biomakromolekul (např. peptidů nebo proteinů), ke kterým dochází v pufrovaných vodných fázích na porézních hydrofilních sorbentech (např. na bázi agarózy či metakrylátových částic modifikovaných hydrofilními skupinami).

Watrex: Obrázek 4: Chromatogram 6 - Watrex DeltaGelTM Mixed C. Chromatogram 7 - Watrex DeltaGelTM Mixed D.

• Rozměry kolon: Watrex GPC/SEC kolony jsou dostupné v analytických (8x250 mm či 8x300mm) i preparativních konfiguracích (20x300 mm).
• Příklady použití: Separace syntetických polymerů, peptidů, proteinů, polysacharidů.

Výhody HPLC kolon Watrex

Kolony vyráběné přímo ve Watrex laboratoři poskytují několik zásadních výhod:

• Vysoká kvalita za přívětivé ceny. Díky tomu, že si kolony sami vyrábí, mohou nabídnout špičkovou kvalitu za velmi dostupné ceny.
• Široká nabídka rozměrů a typů. Nabízí kolony přizpůsobené různým chromatografickým technikám, včetně analytických i preparativních aplikací.
• Flexibilita v aplikacích. Kolony Watrex jsou kompatibilní s řadou mobilních fází a lze je využít pro separaci iontových sloučenin, organických kyselin, polymerů a biomolekul.

Závěr

HPLC a GPC/SEC kolony od společnosti Watrex jsou vysoce spolehlivým řešením pro široké spektrum chromatografických aplikací a kombinují vysokou kvalitu s příznivou cenou. Ať už potřebujete kolony pro reverzní fázi, iontovou výměnu, iontové vylučování, size exclusion chromatografii (SEC) či gel permeaition chromatography (GPC), Watrex produkty vám zaručí vynikající separační vlastnosti a reprodukovatelné výsledky.

Pro více informací neváhejte Watrex kontaktovat ([email protected]) nebo navštivte jejich webové stránky (www.watrex.com).