Průvodce řešením problémů v HPLC - Vysoký a nízky tlak, fluktuace

V prvním díle seriálu o řešení problémů v HPLC jsme se podívali na základní tipy jak Váš HPLC systém provozovat a také osvědčené postupy pro odstraňování problémů, pokud se nakonec vyskytnou.

Druhý díl - chromatografické píky přinesl detailnější pohled na problematiku chromatografických píků z pohledu chvostování nebo frontování, širokých píků, žádných píků, píků navíc nebo píků dvojitých.

Třetí díl seriálu rozebral postupy v případě výskytu fluktuace retenčních časů, ztráty rozlišení, změny citlivosti, driftu základní linie nebo šumu základní linie.

Poslední, čtvrtý díl, se zaměří tlak a varianty nejběžnějších problémů s ním v HPLC spojených. Zodpovíme otázky typu: tlak není zobrazen, ale průtok je správný, Nízký tlak, Fluktuace tlaku, Vysoký tlak.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC

Kompletní příručka dostupná ke stažení v knihovně!

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Tlak není zobrazen, ale průtok je správný

Tlak není zobrazen, ale průtok je správný

Porucha snímače

• Opravte nebo vyměňte snímač tlaku.

Nekompatibilita softwaru

• Použijte alternativní software, který umožňuje záznam tlaku.

Proplachovací ventil ponechán otevřený

• Zavřete ventil.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Nízký tlak

Nízký tlak

Částečná netěsnost v systému

• Zkontrolujte všechna připojení a utáhněte všechna netěsná místa.

Průtok

• Zkontrolujte, zda je v metodě nastaven správný průtok.
• Vyzkoušejte přesnost průtoku pomocí kalibrovaného průtokoměru, nebo změřte čas naplnění definovaného objemu.

Metoda

• Ověřte, zda metoda používá správnou teplotu a správná rozpouštědla.

Špatná kolona

• Použijte kolonu se správnými rozměry a geometrií částic.

Příliš vysoká teplota kolony

• Nastavte odpovídající teplotu kolony a zkontrolujte, zda nedošlo k jejímu poškození, pokud dojde k překročení limitu teploty kolony.

Porucha snímače

• Opravte nebo vyměňte snímač tlaku.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Fluktuace tlaku

Fluktuace tlaku

Vzduchové bubliny

• Propláchněte cestu MF pro odstranění vzduchových bublin.

Opotřebení těsnění pumpy

• Vyměňte těsnění.

Zkontrolujte ventily

• Ultrazvukujte zpětné ventily v isopropanolu.
• Pokud problém přetrvává, vyměňte zpětné ventily.

Netěsnosti

• Poškození těsnění čerpadla může způsobit malé netěsnosti. Vyměňte těsnění. Zkontrolujte spojky.

Nedostatečné odplynění

• Odplyňte rozpouštědlo, vyměňte frity mobilní fáze; je-li nutno opravte degasser.

Použití gradientové eluce

• Cyklus tlaků způsobený změnami viskozity je normální, ale použijte přiměřeně velký objem mixéru.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Vysoký tlak

Vysoký tlak

Nastaven vysoký průtok

• Snižte nastavení průtoku

Ucpaná kolona

• Propláchněte kolonu zpětným tokem (pokud lze), nebo ji vyměňte.

Nekompatibilní MF (sraženina pufru nebo nemísitelné složky)

• Použijte správnou MF; propláchněte kolonu a znovu ekvilibrujte

Nesprávná kolona

• Použijte kolonu správného rozměru a geometrie částic

Zablokovaný injektor

• Odstaňte překážku (zkontrolujte jehlu, smyčku, ventil s HPV výstup).

Zablokovaná ochranná kolona/kartridž

• Vyměňte nebo odstraňte guard kolonu

Zablokovaný in-line filtr

• Vyměňte nebo odstraňte filtr.

Příliš nízká teplota kolony

• Nastavte správnou teplotu.

Vadný senzor

• Opravte nebo vyměňte snímač tlaku.

In-line filtr pumpy je zablokován

• Vyměňte filtr