Řešení problémů v HPLC: RT, Rozlišení, Citlivost, Drift, Šum | LabRulez LCMS

Průvodce řešením problémů v HPLC - Retenční čas, Rozlišení, Citlivost, Drift a Šum

Po, 29.11.2021
| Originální článek z: Shimadzu
Třetí díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se podívá na postupy v případě výskytu fluktuace retenčních časů, ztráty rozlišení, změny citlivosti, driftu základní linie nebo šumu základní linie.
Video placeholder
  • Foto: Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Retenční čas, Rozlišení, Citlivost, Drift a Šum
  • Video: Shimadzu Analytical and Measuring Instruments: Real-Time Mobile Phase Monitoring with the Nexera UHPLC Series

V prvním díle seriálu o řešení problémů v HPLC jsme se podívali na základní tipy jak Váš HPLC systém provozovat a také osvědčené postupy pro odstraňování problémů, pokud se nakonec vyskytnou.

Druhý díl - chromatografické píky přinesl detailnější pohled na problematiku chromatografických píků z pohledu chvostování nebo frontování, širokých píků, žádných píků, píků navíc nebo píků dvojitých.

Třetí díl seriálu rozebere postupy v případě výskytu fluktuace retenčních časů, ztráty rozlišení, změny citlivosti, driftu základní linie nebo šumu základní linie.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC

Kompletní příručka dostupná ke stažení v knihovně!

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Fluktuace retenčních časů

Fluktuace retenčních časů

Průtok
  • Zkontrolujte, zda metoda používá správný průtok. Průtokoměrem zjistěte skutečný průtok.
Nedostatečná stabilizace
  • Kolona s reverzní fází by měla být ekvilibrována nejméně deseti-násobným objemem MF. Pokud je i toto nedostatečné, zvyšte čas ekvilibrace.
  • Platí i pro další techniky, jako je iontová výměna a HILIC.
Špatná regulace teploty
  • Zkontrolujte, zda metoda používá správnou teplotu.
  • Zajistěte, aby teplota v kolonové peci byla přesná.
Změna rozměrů kolony
  • Ujistěte se, že je použita správná kolona včetně rozměrů.
Změna stacionární fáze kolony
  • Pro paměťové efekty nepoužívejte kolonu s ion párovým činidlem pro jinou mobilní fázi.
  • Vysušená stacionární fáze (historicky nesprávně „kolaps fáze“)
Nesprávná mobilní fáze
  • Zajistěte, aby byla mobilní fáze připravena správně.
  • Pokud používáte čerpadlo k směšování mobilní fáze, ověřte, že dávkování je přesné.
  • Zajistěte, aby byla použita správná mobilní fáze a správné trasy dle zvolené metody.
Netěsnosti
  • Zkontrolujte, zda v systému nejsou uvolněné spoje.
Vzduchová bublina v čerpadle
  • Odvzdušněte čerpadlo pomocí odvzdušňovacího ventilu.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Ztráta rozlišení

Ztráta rozlišení

Změna šířky píků
  • Změny vlastností kolony a nástřiku vzorku/účinnosti kolony může mít za následek rozšíření píků.
  • Zajistěte, aby kolona nebyla přetížena nebo vyměňte kolonu aby zatížení snesla.
Změny retenčního času
  • Viz popis v části retenční čas.
Změna mobilní fáze nebo odpaření
  • Připravte nové mobilní fáze.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Změny citlivosti

Změny citlivosti

Problém s injektorem
  • Změny dávkovacího objemu injektoru, k identifikaci změn použijte QC kontrolní vzorek.
  • Zkontrolujte metodu a podrobnosti k nástřiku.
  • Zvyšte proplach jehly a smyčky k potlačení přenosu vzorku mezi nástřiky.
  • Odvzdušněte dávkovací čerpadlo.
Vzorek
  • Degradace vzorku může snížit píky analytů a zvýšit píky nečistot. Připravte nový vzorek.
  • Zkontrolujte přípravu vzorku aby bylo zajištěno, že koncentrace se nezměnila.
Detektor
  • Pokud se změnila citlivost u všech píků, zkontrolujte nastavení a citlivost detektoru.
  • Zkontrolujte životnost lampy a vyměňte ji, pokud je za limitem.
  • Možná bude nutné vyměnit okénka průtokových kyvet.
Změna vlastností kolony
  • Zkontrolujte šířky píku a rozlišení. Otestujte výkon kolony pomocí standardního QC testu.
Netěsnosti přístroje
  • Zkontrolujte, zda v systému nejsou uvolněné spoje.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Drift základní linie

Drift základní linie

Fluktuace teploty kolony
  • Zkontrolujte teplotu kolony.
Nízká kvalita mobilní fáze
  • Použijte HPLC rozpouštědla, vysoce čisté soli a přísady.
  • Zajistěte, aby byly mobilní fáze dostatečně odplyněny.
Kontaminant nebo vzduchová bublina v kyvetě detektoru
  • Propláchněte průtokovou kyvetu isopropanolem.
  • Je-li nutno, propláchněte kyvetu 1M kys. dusičnou.
Prasklé okénko kyvety
  • Vyměňte okénka kyvety.
Problém s mícháním mobilní fáze
  • Použijte větší nebo efektivnější mixér.
Pomalá ekvilibrace kolony
  • Vypláchněte kolonu mobilní fází (minimálně 10–20 objemy kolony).
Analyty s dlouhým RT eluující v dalším nástřiku
  • Použijte proplach mezi nástřiky, nebo, pokud je možno, použijte zpětný proplach kolony k vymytí kontaminantů s dlouhým retenčním časem.
Recyklovaná mobilní fáze, ale detektor není správně vynulován
  • Proveďte autozero detektoru.
Detektor (UV) není nastaven na maximum absorbance
  • Změňte vlnovou délku na maximum UV absorbance.

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Šum základní linie

Šum základní linie

Bublina v detektoru nebo čerpadle
  • Dostatečně odplyňte mobilní fázi a propláchněte cestu MF (mobilní fáze)
Netěsnost
  • Zkontrolujte cesty MF a spojky
Nedokonalé míchání mobilní fáze
  • Předmíchejte mobilní fázi nebo použijte větší mixér
Teplotní změny detektoru
  • Použijte teplotně stabilizovanou průtokovou celu detektoru
Kontaminovaná nebo vadná mobilní fáze
  • Zkontrolujte mobilní fázi
Nemísitelné složky mobilní fáze (pozorujeme i tlakové pulzy)
  • Použijte mísitelné složky MF
Bublina zachycená v systému
  • Propláchněte a vyčistěte průtokovou cestu
Slabá lampa detektoru
  • Vyměňte lampu
Únik náplně kolony
  • Vyměňte kolonu
SHIMADZU Handels GmbH - organizační složka
Další projekty
Sledujte nás
Další informace
WebinářeO násKontaktujte násPodmínky užití

LabRulez s.r.o. Všechna práva vyhrazena.