Průvodce řešením problémů v HPLC - chromatografické píky

St, 17.11.2021
| Originální článek z: Shimadzu
Druhý díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se podívá na problematiků chromatografických píků jako je chvostování nebo frontování, široké píky, žádné píky, píky navíc nebo píky dvojité.
Video placeholder
  • Foto: Průvodce řešením problémů v HPLC - chromatografické píky
  • Video: Shimadzu Analytical and Measuring Instruments: Auto-diagnostics and Auto-recovery functions to Enhance Lab Productivity

V prvním díle seriálu o řešení problémů v HPLC jsme se podívali na základní tipy jak Váš HPLC systém provozovat a také osvědčené postupy pro odstraňování problémů, pokud se nakonec vyskytnou. Druhý díl série přináší detailnější pohled na problematiku chromatografických píků

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC

Kompletní příručka dostupná ke stažení v knihovně!

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Žádné píky

Žádné píky

Problémy s nastavením detektoru
  • Zkontrolujte, zda je zapnutá lampa detektoru
  • Zkontrolujte, zda jsou připojeny elektrické kabely
  • kontrolujte životnost lampy a v případě překročení ji vyměňte
  • Zajistěte, aby byl dle fyzikálně chemických vlastností analytu použit vhodný detektor
  • Zkontrolujte, zda metoda používá vhodné nastavení detektoru odpovídající hledaným látkám
Eluční čas analytů delší než doba analýzy
  • Zkontrolujte složení mobilní fáze
  • Zkontrolujte, zda se používá správná kolona
  • Prodlužte čas analýzy
  • Zvyšte eluční schopnost mobilní fáze
Problémy se vzorkem
  • Zajistěte, aby se vzorek nezměnil. Připravte čerstvé vzorky
  • Ujistěte se, že je vzorek v autosampleru je ve správné poloze
  • Problém s adsorpcí vzorku
Ucpaná jehla
  • Pokuste se odstranit ucpání nebo vyměnit jehlu
  • Zjistěte, proč je jehla ucpána (např. septem nebo špatnou přípravou vzorku)
Přístroj
  • Žádný průtok mobilní fáze, případně proplachovací ventil ponechán otevřený
  • Odvzdušněte systém, abyste odstranili možné vzduchové bubliny v čerpadle
  • Propláchněte injektor, abyste odstranili vzduchové bubliny v dávkovacím čerpadle

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Dvojité píky

Zdvojené píky

Znečištěný vstup kolony nebo předkolony
  • Vyměňte předkolonu nebo předfiltr nebo vloženou filtrační fritu
  • Propláchněte předkolonu nebo vlastní kolonu zpětným tokem (pokud lze)
Rozpouštědlo vzorku je nekompatibilní s mobilní fází
  • Vyměňte rozpouštědlo vzorku
  • Použijte počáteční složení mobilní fáze (pokud ze)
  • Použijte funkci vstřikování Co-Solvent nebo POISe
Vlastnosti analytu
  • Možnost změny izomeru nebo analytu - změňte podmínky

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Chvostující píky

Chvostující píky

Sekundární interakce
  • U zásad zvyšte pH (jak lze); u kyselin snižte pH
  • Zvyšte iontovou sílu pufru (jak lze)
  • Změňte kolonu
Mrtvý objem
  • Znovu připojte kolonu s fitinky pro redukci mrtvého objemu.
Degradace kolony
  • Vyměňte kolonu
Trhliny v koloně
  • Vyplňte trhlinu (pravděpodobně ale vlastnosti kolony už nebudou dobré).
Interferující pík
  • Použijte delší kolonu; další vývoj metody
Nevhodné pH mobilní fáze
  • Upravte pH (doporučují se 2 jednotky pH od pKa).
Chelatace vzorku na aktivních místech
  • Omezte interakci pomocí ion párového činidla, modifikátoru nebo sekvestračního činidla
  • Změňte kolonu nebo průtokovou cestu za a injektorem
Nedostatečná pufrace
  • Použijte koncentraci pufru 50-100 mM (UV metody)
Nástřik vzorku
  • Snižte koncentraci vzorku

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Čelní chvostování

Čelní chvostování

Degradace kolony
  • Vyměňte kolonu
Mobilní fáze/rozpouštědlo vzorku nejsou kompatibilní
  • Upravte složení mobilní fáze.
  • Použijte počáteční složení mobilní fáze (pokud lze)
Přetížení vzorkem
  • Snižte koncentraci vzorku

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Široké píky

Široké píky

Nástřik vzorku
  • Snižte koncentraci vzorku nebo nástřik
Problém s kolonou
  • Degradace kolony, kolona by měla být vyměněna
Problém s nastavením termostatu kolony
  • Zkontrolujte správnou teplotu termostatu. Vyšší teplota kolony obvykle vede k rychlejší eluci látek (pozor na teplotní limit kolony doporučený výrobcem)
Mobilní fáze
  • Ověřte, že používáte správnou mobilní fázi
Nastavení přístroje
  • Zvyšte vzorkovací frekvenci detektoru pro zjištění, zda se zlepší tvar píků
  • Dlouhé kapiláry a další faktory zvyšující vnitřní objem systému rozmývají píky, zkontrolujte možnosti omezení
  • Zkontrolujte, zda je nastaven správný průtok MF (mobilní fáze) a je dodržován

Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Píky navíc

Píky navíc

Další látky ve vzorku
  • Pokud jsou ve vzorku další látky, není to chyba
Píky s dlouhým RT z předchozí analýzy
  • Prodlužte RT (retenční čas), nebo zvyšte eluční sílu MF
  • zvyšte průtok MF
Ghost píky
  • Zkontrolujte čistotu MF
  • Použijte trap ghost píků (je-li možno)
SHIMADZU Handels GmbH - organizační složka
 

Mohlo by Vás zajímat

Confident and sensitive profiling of lipid nanoparticle raw materials and impurity identification using a LC/CAD/HRAM-MS method with inverse gradient

Instrumentace
LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/Orbitrap
Výrobce
Thermo Fischer Scientific
Zaměření
Farmaceutická analýza

Analysis of Per- and Polyfluoroalkyl Substances (PFAS) in Edible Fish Tissue

Instrumentace
Spotřební materiál, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
Potraviny a zemědělství

Seznámení s přístroji Wyatt Technology

Instrumentace
GPC/SEC
Výrobce
Waters
Zaměření
---

Your Essential Guide to Sugar Analysis with Liquid Chromatography

Instrumentace
Příprava vzorků, Spotřební materiál, Software, HPLC, LC/MS, LC/SQ
Výrobce
Waters
Zaměření
Potraviny a zemědělství

GPC/SEC Troubleshooting and Good Practice

Instrumentace
GPC/SEC
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
---
 

Podobné články


Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Retenční čas, Rozlišení, Citlivost, Drift a Šum

Třetí díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se podívá na postupy v případě výskytu fluktuace retenčních časů, ztráty rozlišení, změny citlivosti, driftu základní linie nebo šumu základní linie.

Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Vysoký a nízky tlak, fluktuace

Čtvrtý díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se komplexně podívá na tlak. Co dělat, když je vysoký nebo nízký, co když pozorujeme fluktuaci tlaku nebo tlak není zobrazen?
 

Podobné články


Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Retenční čas, Rozlišení, Citlivost, Drift a Šum

Třetí díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se podívá na postupy v případě výskytu fluktuace retenčních časů, ztráty rozlišení, změny citlivosti, driftu základní linie nebo šumu základní linie.

Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Vysoký a nízky tlak, fluktuace

Čtvrtý díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se komplexně podívá na tlak. Co dělat, když je vysoký nebo nízký, co když pozorujeme fluktuaci tlaku nebo tlak není zobrazen?
 

Podobné články


Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Retenční čas, Rozlišení, Citlivost, Drift a Šum

Třetí díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se podívá na postupy v případě výskytu fluktuace retenčních časů, ztráty rozlišení, změny citlivosti, driftu základní linie nebo šumu základní linie.

Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Vysoký a nízky tlak, fluktuace

Čtvrtý díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se komplexně podívá na tlak. Co dělat, když je vysoký nebo nízký, co když pozorujeme fluktuaci tlaku nebo tlak není zobrazen?
 

Podobné články


Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Retenční čas, Rozlišení, Citlivost, Drift a Šum

Třetí díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se podívá na postupy v případě výskytu fluktuace retenčních časů, ztráty rozlišení, změny citlivosti, driftu základní linie nebo šumu základní linie.

Článek | Akademie

Průvodce řešením problémů v HPLC - Vysoký a nízky tlak, fluktuace

Čtvrtý díl seriálu o tzv. troubleshootingu v HPLC se komplexně podívá na tlak. Co dělat, když je vysoký nebo nízký, co když pozorujeme fluktuaci tlaku nebo tlak není zobrazen?