Průvodce řešením problémů v HPLC - chromatografické píky
St, 17.11.2021
| Originální článek z: Shimadzu
- Foto: Průvodce řešením problémů v HPLC - chromatografické píky
- Video: Shimadzu Analytical and Measuring Instruments: Auto-diagnostics and Auto-recovery functions to Enhance Lab Productivity
V prvním díle seriálu o řešení problémů v HPLC jsme se podívali na základní tipy jak Váš HPLC systém provozovat a také osvědčené postupy pro odstraňování problémů, pokud se nakonec vyskytnou. Druhý díl série přináší detailnější pohled na problematiku chromatografických píků
Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC
Kompletní příručka dostupná ke stažení v knihovně!
Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Žádné píky
Žádné píky
Problémy s nastavením detektoru
- Zkontrolujte, zda je zapnutá lampa detektoru
- Zkontrolujte, zda jsou připojeny elektrické kabely
- kontrolujte životnost lampy a v případě překročení ji vyměňte
- Zajistěte, aby byl dle fyzikálně chemických vlastností analytu použit vhodný detektor
- Zkontrolujte, zda metoda používá vhodné nastavení detektoru odpovídající hledaným látkám
Eluční čas analytů delší než doba analýzy
- Zkontrolujte složení mobilní fáze
- Zkontrolujte, zda se používá správná kolona
- Prodlužte čas analýzy
- Zvyšte eluční schopnost mobilní fáze
Problémy se vzorkem
- Zajistěte, aby se vzorek nezměnil. Připravte čerstvé vzorky
- Ujistěte se, že je vzorek v autosampleru je ve správné poloze
- Problém s adsorpcí vzorku
Ucpaná jehla
- Pokuste se odstranit ucpání nebo vyměnit jehlu
- Zjistěte, proč je jehla ucpána (např. septem nebo špatnou přípravou vzorku)
Přístroj
- Žádný průtok mobilní fáze, případně proplachovací ventil ponechán otevřený
- Odvzdušněte systém, abyste odstranili možné vzduchové bubliny v čerpadle
- Propláchněte injektor, abyste odstranili vzduchové bubliny v dávkovacím čerpadle
Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Dvojité píky
Zdvojené píky
Znečištěný vstup kolony nebo předkolony
- Vyměňte předkolonu nebo předfiltr nebo vloženou filtrační fritu
- Propláchněte předkolonu nebo vlastní kolonu zpětným tokem (pokud lze)
Rozpouštědlo vzorku je nekompatibilní s mobilní fází
- Vyměňte rozpouštědlo vzorku
- Použijte počáteční složení mobilní fáze (pokud ze)
- Použijte funkci vstřikování Co-Solvent nebo POISe
Vlastnosti analytu
- Možnost změny izomeru nebo analytu - změňte podmínky
Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Chvostující píky
Chvostující píky
Sekundární interakce
- U zásad zvyšte pH (jak lze); u kyselin snižte pH
- Zvyšte iontovou sílu pufru (jak lze)
- Změňte kolonu
Mrtvý objem
- Znovu připojte kolonu s fitinky pro redukci mrtvého objemu.
Degradace kolony
- Vyměňte kolonu
Trhliny v koloně
- Vyplňte trhlinu (pravděpodobně ale vlastnosti kolony už nebudou dobré).
Interferující pík
- Použijte delší kolonu; další vývoj metody
Nevhodné pH mobilní fáze
- Upravte pH (doporučují se 2 jednotky pH od pKa).
Chelatace vzorku na aktivních místech
- Omezte interakci pomocí ion párového činidla, modifikátoru nebo sekvestračního činidla
- Změňte kolonu nebo průtokovou cestu za a injektorem
Nedostatečná pufrace
- Použijte koncentraci pufru 50-100 mM (UV metody)
Nástřik vzorku
- Snižte koncentraci vzorku
Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Čelní chvostování
Čelní chvostování
Degradace kolony
- Vyměňte kolonu
Mobilní fáze/rozpouštědlo vzorku nejsou kompatibilní
- Upravte složení mobilní fáze.
- Použijte počáteční složení mobilní fáze (pokud lze)
Přetížení vzorkem
- Snižte koncentraci vzorku
Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Široké píky
Široké píky
Nástřik vzorku
- Snižte koncentraci vzorku nebo nástřik
Problém s kolonou
- Degradace kolony, kolona by měla být vyměněna
Problém s nastavením termostatu kolony
- Zkontrolujte správnou teplotu termostatu. Vyšší teplota kolony obvykle vede k rychlejší eluci látek (pozor na teplotní limit kolony doporučený výrobcem)
Mobilní fáze
- Ověřte, že používáte správnou mobilní fázi
Nastavení přístroje
- Zvyšte vzorkovací frekvenci detektoru pro zjištění, zda se zlepší tvar píků
- Dlouhé kapiláry a další faktory zvyšující vnitřní objem systému rozmývají píky, zkontrolujte možnosti omezení
- Zkontrolujte, zda je nastaven správný průtok MF (mobilní fáze) a je dodržován
Shimadzu: Průvodce řešením problémů v HPLC - Píky navíc
Píky navíc
Další látky ve vzorku
- Pokud jsou ve vzorku další látky, není to chyba
Píky s dlouhým RT z předchozí analýzy
- Prodlužte RT (retenční čas), nebo zvyšte eluční sílu MF
- zvyšte průtok MF
Ghost píky
- Zkontrolujte čistotu MF
- Použijte trap ghost píků (je-li možno)
Podívejte se na další Novinky, Aplikace, Instrumentaci nebo Webináře Shimadzu z oblasti HPLC & LCMS na jejich profilu.
SHIMADZU Handels GmbH - organizační složka