Od roku 2018 se na našem pracovišti <a href="http://www.radanal.cz/cs/">Institutu Nutrice a Diagnostiky s.r.o.</a> v Pardubicích zabýváme průtokovou injekční analýzou ve spojení s multikanálovou elektrochemickou detekcí (FIA-ECD). K téhle originální metodě jsme dospěli po více než 20 letech zkušeností s elektrochemickou detekcí HPLC. FIA-ECD se ukazuje jako jediné možné řešení pro hodnocení antioxidačních látek ve stovkách vzorků extraktů z ovoce, listů, kůry stromů a bylin. Zajímavým zjištěním je i sledování celkové antioxidační aktivity moči ve vztahu k lidskému zdraví.
V případě zájmu o stanovení konkrétních látek ve víně (ve vztahu ke zdraví např. resveratrol, rutin, quercetin) je na našem pracovišti volena metoda UPLC-MS/MS (Thermo Fisher Scientific – Ultimate 3000/TSQ Quantum Access Max) – vysokoúčinná kapalinová chromatografie s detekcí na trojitém kvadrupólu. 
<blockquote>
Oldschooler&#39;s s jsou rozhovory s Tomášem Nezmeškalem, kde veteráni z veřejného prostoru odhalují příběhy a historky, které od nich ještě nezazněly.
</blockquote>
<h3>Stanovení celkové antioxidační aktivity v biologickém materiálu pomocí FIA-ECD metody</h3>
Naše laboratoř se dlouhodobě zabývá využití elektrochemie pro studium bioaktivních látek. Byla vyvinuta metoda průtokové injekční analýzy s elektrochemickou detekcí (FIA-ECD) pro hodnocení celkové antioxidační aktivity nápojů, potravních doplňků a extraktů z ovoce, listí a bylin. Tato metoda je založená na měření náboje v μC a poskytuje objektivní srovnání schopností antioxidačních látek předávat náboj nezávisle na matrici. Byla použita pro hodnocení celkové antioxidační aktivity lidské moče. Metoda poskytuje velmi zajímavé srovnání.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_1_Vzorky_moci_analyzovane_FIA_ECD_354ec6250f/RADANAL-Obrazek-1-Vzorky-moci-analyzovane-FIA-ECD..png" alt="RADANAL: Obrázek 1: Vzorky moči analyzované FIA-ECD."/>
<h3>FIA-ECD</h3>
<h5>Přístrojové vybavení pro FIA-ECD:</h5>
<ul>
<li>Model 582 Solvent Delivery Module</li>
<li>Model 542 HPLC Autosampler</li>
<li>Elektrochemický detektor Coularray Detector ESA, Model 5600A (ESA Inc, USA)</li>
</ul>
<h5>FIA-ECD podmínky:</h5>
<ul>
<li>Mobilní fáze: 90 % KH2PO40,05M + 10% ACN (pH 4,8)Průtok: 1 ml/min</li>
<li>Isokratický proces</li>
<li>Nástřik: 10 μl</li>
<li>Potenciály: 200, 400, 600 a 800 mV</li>
<li>Čas analýzy: 1,1 min</li>
<li>Vzorek zředěný mobilní fází 1 : 3 (plná moč : mobilní fáze)</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_2_Pristrojove_vybaveni_pro_FIA_ECD_pumpy_autosampler_Coul_Arraydetektor_a_analyzator_86cc9d4774/RADANAL-Obrazek-2-Pristrojove-vybaveni-pro-FIA-ECD-pumpy-autosampler-CoulArraydetektor-a-analyzator.png" alt="RADANAL: Obrázek 2: Přístrojové vybavení pro FIA-ECD - pumpy, autosampler, CoulArraydetektor a analyzátor"/>
<h3>HPLC-MS/MS</h3>
<h5>Přístrojové vybavení pro HPLC-MS/MS:</h5>
<ul>
<li>UltiMate 3000 Binary RSLC</li>
<li>TSQ Quantum Access Max s ionizací elektrosprejem H–ESI (ThermoFisher Scientific, USA)</li>
</ul>
<h5>HPLC podmínky:</h5>
Kolona: Kinetex F5 100 Å 1,7 μm 50 x 2,1 mm (Phenomenex)
<ul>
<li>Univerzální předkolona: Zorbax Eclipse XDB-C18, 4,6 x 5 mm, 1,8μm (Agilent)</li>
<li>Mobilní fáze A: 0,1 obj. % kyseliny mravenčí ve vodě</li>
<li>Mobilní fáze B: 0,1 obj. % kyseliny mravenčí v methanolu</li>
</ul>
<h5>MS Parametry:</h5>
<ul>
<li>Ionizační mód: ESI+</li>
<li>Scenovací mód: SRM</li>
<li>Čas skenovacího cyklu: 0,5 s</li>
<li>Tlak kolizního plynu: 1,5 mTorr</li>
<li>Teplota kapiláry: 325 °C</li>
<li>Teplota odpařovací jednotky: 300 °C</li>
<li>Tlak sušícího plynu: 45 arb units</li>
<li>Tlak čistícího plynu: 2 arb units</li>
<li>Hodnota sprejovacího napětí: 3300 V</li>
</ul>
<h3>Výsledky</h3>
Pomocí vyvinuté FIA-ECD metody byla zjištěna celková antioxidační aktivita ve vzorcích sbírané moči šedesátiletého dobrovolníka v období prosinec 2017 až listopad 2018 (celkem 281 vzorků). Ve vzorcích byly pomocí HPLC-MS/MS kvantifikovány markery oxidačního poškození DNA (8-hydroxy-2&#39;-deoxyguanosin) a RNA (8-hydroxyguanosin).V rámci studie byla posuzována souvislost mezi hladinami markerů poškození nukleových kyselin v moči a hladinami antioxidační aktivity lidské moče.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_3_Stanoveni_celkove_antioxidacni_aktivity_ve_vybranych_vzorcich_pomoci_prutokove_injekcni_analyzy_s_elektrochemickou_detekci_869e102a97/RADANAL-Obrazek-3-Stanoveni-celkove-antioxidacni-aktivity-ve-vybranych-vzorcich-pomoci-prutokove-injekcni-analyzy-s-elektrochemickou-detekci..png" alt="RADANAL: Obrázek 3: Stanovení celkové antioxidační aktivity ve vybraných vzorcích pomocí průtokové injekční analýzy s elektrochemickou detekcí."/>
Průměrná hodnota antioxidační aktivity vzorků moči (FIA-ECD) byla nalezena 360 ± 128 µC/ml a pohybovala se od 88 µC/ml do 872 µC/ml. Koncentrační hladiny biomarkerů sledovaných metodou HPLC-MS/MS se pohybovaly v rozmezí hodnot 1,5 - 163 ng/ml (8-hydroxyguanosin) a 0,1 - 103 ng/ml (8-hydroxy-2´-deoxyguanosin). Průběh nalezených koncentračních hladin analytů nekoreloval s antioxidační aktivitou moče. Bylo zjištěno, že z hlediska antioxidační aktivity může být lidská moč hodnotnější než kvalitní červené víno.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/RADANAL_Obrazek_4_Graficke_srovnani_vysledku_mereni_celkove_antioxidacni_aktivity_plne_moce_metodou_FIA_ECD_a_mereni_koncentrace_dvou_biomarkeru_metodou_UPLC_MSMS_16f6d32f0b/RADANAL-Obrazek-4-Graficke-srovnani-vysledku-mereni-celkove-antioxidacni-aktivity-plne-moce-metodou-FIA-ECD-a-mereni-koncentrace-dvou-biomarkeru-metodou-UPLC-MSMS.png" alt="RADANAL: Obrázek 4: Grafické srovnání výsledků měření celkové antioxidační aktivity plné moče metodou FIA-ECD a měření koncentrace dvou biomarkerů metodou UPLC-MS/MS"/>

Doporučuji se propít ke zdraví - Stanovení antioxidantů pomocí FIA-ECD a UHPLC-MS

Potraviny

Zdraví

Vědecký článek

Video

Je společnost zabývající se výzkumem a vývojem, prodejem a aplikační podporou chromatografických metod včetně chromatografického spotřebního materiálu. Společnost je organizátorem mezinárodní konference INDC a konference VITATOX.

RADANAL

RADANAL s.r.o.

Research And Development Analytical Nutrition Antiaging Laboratory působí v oboru aplikací kapalinové chromatografie pro studium a sledování vlivu přírodních látek, zejména vitaminů a dalších antioxidantů, na lidské zdraví, chování, stárnutí, duševní a fyzickou výkonnost a krásu.

Stanovení markerů poškození DNA a RNA (RADANAL)

Analýza biologických vzorků metodou ultraúčinné kapalinové chromatografie kombinované s hmotnostní spektrometrií UHPLC-MS.

<h3>Analyzované vzorky:</h3>
<ul>
<li>Biologické vzorky (např. moč)</li>
</ul>
<h3>Analyzované látky:</h3>
<ul>
<li>8-hydroxy-2-deoxyguanosin</li>
<li>8-hydroxyguanosin</li>
</ul>
Ve vzorcích jsou pomocí HPLC-MS/MS kvantifikovány markery oxidačního poškození DNA (8-hydroxy-2&#39;-deoxyguanosin) a RNA (8-hydroxyguanosin).
<h3>Přístrojové vybavení:</h3>
<h5>Přístrojové vybavení pro HPLC-MS/MS</h5>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=ultimate&amp;mainauthorItems=3">UltiMate 3000 Binary RSLC</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=access%20max&amp;mainauthorItems=3&amp;instrumentationItems=35-31-32">TSQ Quantum Access Max</a> s ionizací elektrosprejem H–ESI</li>
</ul>

Stanovení markerů poškození DNA a RNA (RADANAL)

Analyzované vzorky:

Analyzované látky:

Přístrojové vybavení:

Přístrojové vybavení pro HPLC-MS/MS

Novinky

Doporučuji se propít ke zdraví - Stanovení antioxidantů pomocí FIA-ECD a UHPLC-MS