Analysis of anti-epileptic drugs in human serum using an Agilent Ultivo LC/TQ

Význam tématu

Analytická kvantifikace antiepileptik v lidském séru je klíčová pro klinický výzkum a terapeutickou slohovou léčbu, neboť tyto látky se ve vzorcích vyskytují v širokém rozsahu koncentrací. Potřeba monitorovat desítky sloučenin současně při vysoké citlivosti a selektivitě zároveň vyžaduje optimalizované metodiky a kompaktní spektrometrické systémy vhodné do laboratorního prostředí s omezenou velikostí přístrojů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit vysoce citlivou LC-TQ metodu pro simultánní stanovení 15 antiepileptik v lidském séru pomocí kompaktního přístroje Agilent Ultivo LC/TQ. Výsledky byly porovnány s referenčním systémem Agilent 6470 LC/TQ za identických analytických podmínek s ohledem na lineárnost, přesnost, opakovatelnost a limit detekce.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly připraveny jednoduchou proteinovou precipitací metanolem následovanou 10× ředěním vodou. Chromatografie probíhala na Agilent 1290 Infinity II UHPLC (včetně vysokotlaké pumpy, autosampleru a multikolonového termostatu) s analytickou kolonkou Poroshell 120 EC-C18 2,1×100 mm, 2,7 µm. Mobilní fáze A byla 2 mM acetát amonný ve vodě, fáze B 2 mM acetát amonný v methanolu, gradientní eluce 10–95 % B během 7,5 minut při průtoku 0,4 mL/min a teplotě 50 °C. Sportrometrie byla prováděna na Agilent Ultivo Triple Quadrupole Mass Spectrometer v režimu Dynamic MRM, kladná ionizace, zdrojové parametry: teplota sušícího plynu 350 °C, průtok 12 L/min, tlak mlžení 50 psi, napětí kapiláry 3 500 V. Metodika sledovala dvě přechodové selekce pro každý analyz včetně interakce s fosfolipidy pro odhad potlačení signálu.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární nebo kvadratické kalibrační křivky (R2 > 0,994) v rozsahu 0,15–20 000 ng/mL, na kolonce byly dosaženy LOQ od 0,05 do 23 pg. Přesnosti (tzv. accuracy) u nejnižších kalibračních hladin byly v toleranci ±20 % a mezilaboratorní opakovatelnost (CV) nepřesáhla 15 %. Porovnání Ultivo vs 6470 ukázalo srovnatelnou citlivost (S/N) a dynamický rozsah bez ztráty kvality dat navzdory výrazně menší velikosti Ultivo přístroje.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé (<10 min na injekci) a přesné simultánní stanovení širokého spektra antiepileptik v biologických matricích. Díky kompaktnímu rozměru LC/TQ jednotky Ultivo je vhodná pro klinická pracoviště s omezeným prostorem, podporuje high‐throughput analýzy a zjednodušuje laboratorní workflow.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj by mohl zahrnovat rozšíření panelu o další antiepileptika či metabolity, detailnější hodnocení matričních interferencí a integraci automatizovaných kroků přípravy vzorků. Miniaturizace a modularita LC/MS platformy napomáhají širšímu nasazení v POC testování a personalizované medicíně.

Závěr

Agilent Ultivo LC/TQ poskytuje ekvivalentní analytický výkon vůči běžné LC/TQ platformě 6470, a to s výhodou výrazně menšího přístrojového uspořádání. Metoda splňuje požadavky klinického výzkumu na citlivost, selektivitu a dynamický rozsah pro monitoring antiepileptik.

Reference

1. Frick L. E., Miller V. P. Simultaneous LC/MS/MS Quantitation of 20 Anti-epileptic Drugs in Human Serum. Poster MSACL 2017, Palm Springs, CA.