Simultaneous LC/MS/MS Quantitation of 20 Antiepileptic Drugs in Human Serum

Význam tématu

Antiepileptická léčiva představují širokou skupinu sloučenin s velmi odlišnými terapeutickými koncentracemi v lidském séru. Klinické monitorování jejich hladin je nezbytné pro optimalizaci léčby, prevenci toxicity a zajištění účinnosti terapie. Metoda LC/MS/MS umožňuje citlivou a specifickou kvantifikaci více analyzovaných látek v jednom vyšetření a je tak ideální pro tuto aplikaci.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat robustní a přesnou metodu pro simultánní stanovení 20 antiepileptických látek v lidském séru. Metoda měla pokrýt široké dynamické rozpětí (od desítek ng/mL až po stovky µg/mL) a zajistit vysokou reprodukovatelnost a přesnost v rutinním provozu.

Použitá metodika

Vzorek séra byl připraven jednoduchou precipitací proteinů methanolem za přítomnosti izotopově značených interních standardů, následuje ředění vodou a přímá injekce do LC/MS/MS.
Chromatografické rozdělení probíhalo na C18 kolonce Agilent Poroshell 120 EC-C18 (2,1×100 mm, 2,7 µm) při teplotě 50 °C, gradientní eluční pufry obsahovaly 2 mM ammonium acetát v čisté vodě a v methanolu. Doba analýzy jednoho vzorku byla méně než 10 minut.

Použitá instrumentace

• LC: Agilent 1290 Infinity II pumpa, autosampler a multicolumn termostat
• MS: Agilent 6460 Triple Quadrupole s technologií Jet Stream
• Režim měření: dynamické MRM v pozitivním a negativním ionizačním módu
• Software: MassHunter Acquisition, Quantitative Analysis a Qualitative Analysis

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární nebo kvadratické kalibrační závislosti v rozsahu 12 ng/mL až 200 000 ng/mL pro jednotlivé látky, s koeficienty determinace (R²) vyššími než 0,997. Nejvyšší kalibrační koncentrace se pohybovaly mezi 1,5 µg/mL a 200 µg/mL dle analyzované látky. Přesnost byla v nejnižší úrovni do 20 % a při vyšších hladinách do 15 %. Reprodukovatelnost (CV) byla všude pod 15 %, většinou pod 10 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje simultánní stanovení širokého spektra antiepileptik v klinických, farmakokinetických a QA/QC laboratořích. Jednoduchá příprava vzorku, krátký analytický čas a vysoká spolehlivost výsledků urychlují rozhodovací procesy v terapeutickém monitorování.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření panelu o metabolity a další psychofarmaka, automatizace přípravy vzorků, vysokoprůtokové platformy pro zvýšení kapacity analýz a využití strojového učení pro predikci interakcí látek mohou dále zlepšit diagnostiku a personalizovanou medicínu.

Závěr

Vyvinutá metoda LC/MS/MS je rychlá, citlivá a přesná pro kvantitativní stanovení 20 antiepileptik v lidském séru. Splňuje požadavky klinického monitorování a nabízí vysokou robustnost i reprodukovatelnost.

Reference

• Frick LE, Adler CJ, Miller VP. Simultaneous LC/MS/MS Quantitation of 20 Antiepileptic Drugs in Human Serum. Application Note. Agilent Technologies; 2017. Číslo dokumentu 5991-8214EN.