Quantification of antiepileptics in human plasma or serum by LC-HRAM(MS) for clinical research

Význam tématu

Monitorování koncentrací antiepileptik v krvi je klíčové pro optimalizaci léčby pacientů s epilepsií, prevenci nežádoucích účinků a zajištění terapeutického rozmezí. Vysoce selektivní a citlivé metody založené na hmotnostní spektrometrii usnadňují přesné dávkování a výzkumné studie ve farmakokinetice.

Cíle a přehled studie

Studie popisuje validaci analytické metody pro kvantifikaci 26 antiepileptických látek v lidské plazmě či séru za použití LC-HRAM(MS) na přístroji Thermo Scientific Q Exactive Plus. Cílem bylo prokázat dostatečnou citlivost, linearitu, přesnost a reprodukovatelnost metody vhodné pro klinický výzkum a terapeutické monitorování.

Použitá metodika

Interní standardy byly přidány k 50 µl plazmy/séra následně podrobené proteinové precipitaci. Supernatant byl ředěn 10× a injikován do UHPLC. Chromatografie probíhala v režimu přímé injekce na Vanquish Duo UHPLC s dobou analýzy 4,5 minuty. Detekce byla zajištěna módem FullMS-ddMS2 ve dvou polárních režimech, pozitivním i negativním, za použití 23 deuterovaných interních standardů. Kvantifikace vycházela z full scan dat, fragmentační data sloužila pro potvrzení totožnosti.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Duo, přímá injekce, analytická kolona a eluční fáze od RECIPE Chemicals + Instruments.
• MS: Thermo Scientific Q Exactive Plus hybrid quadrupole-Orbitrap s H-ESI II zdrojem.
• Software: TraceFinder 4.1 pro zpracování dat.

Hlavní výsledky a diskuse

LLOQ byly stanoveny v rozmezí 0,020 až 8,33 ng/mL podle jednotlivých látek. Při 1/× vážené lineární regresi byla zachována linearita v celém kalibračním rozsahu. Nosiče analyty vykázaly maximální carryover do 0,1 % (gabapentin, pregabalin). Analytická přesnost (bias) se pohybovala mezi –14,5 % a +15,1 %, intra-denní přesnost (CV) byla nižší než 9,3 % a mezi-denní nižší než 7,9 %. Testy na externích kalitačních vzorcích potvrdily shodu s číslem bias v daném rozmezí.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou selektivitu díky HRAM Orbitrap MS, krátký analytický čas a snadnou přípravu vzorků pro hromadné analýzy. Vhodná je pro výzkum farmakokinetiky, terapeutický monitoring, validaci biologických vzorků a rutinní QA/QC v klinických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj HRAM technologií umožní širší multiplexní panelové analýzy, hlubší identifikaci metabolitů, automatizaci přípravy vzorků a integraci výsledků s datovou vědou či umělou inteligencí pro prediktivní modelování farmakokinetiky.

Závěr

Vyvinutá LC-HRAM(MS) metoda s Orbitrap technologií pro stanovení 26 antiepileptik splňuje požadavky na citlivost, přesnost a reprodukovatelnost, což ji předurčuje k využití v klinickém výzkumu a terapeutickém monitorování léčby epilepsie.