Analytical determination of testosterone in human serum using an Agilent Ultivo Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Měření volného testosteronu v lidské séru je klíčové pro diagnostiku endokrinních poruch, hodnocení terapie a výzkum v klinické biochemii. Rychlé a citlivé analytické metody zvyšují efektivitu laboratoří a zajišťují přesné a reprodukovatelné výsledky.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní, citlivou a rychlou kvantitativní metodu pro stanovení volného testosteronu v séru pomocí Agilent Ultivo Triple Quadrupole LC/MS. Zkoumala se lineárnost, přesnost, rozsah kvantifikace a citlivost nového miniaturního trojčtvercového hmotnostního spektrometru.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: proteinová precipitace 250 µl séra 500 µl acetonitrilu, vortex 1 min, centrifugace 4 min při 10000 rpm, ředění supernatantu vodou.
• Kalibrace: 11bodová křivka 0,001–100 ng/ml, interní standard 25 ng/ml testosteron-d3.
• UHPLC: Agilent 1290 Infinity II, kolona Poroshell120 EC-C18 (2.1 × 50 mm, 2.7 µm), teplota 55 °C, mobilní fáze A vodný roztok kyseliny mravenčí a amonium acetátu, B methanol, gradient 60–95–60 % B, průtok 0,5 ml/min, doba analýzy 6 min.
• MS/MS: Agilent Ultivo Triple Quadrupole v režimu MRM, pozitivní ionizace, optimalizované přechody m/z 289,2→109,1 a 292,2→97,0, teploty 300/380 °C, přítlak 50 psi, rozlišení 0,7 u., doba měření 75 ms.

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineárnost: koeficient R2 > 0,999 (1 pg/ml až 100 ng/ml) s vážením 1/x.
• Citlivost: kvantifikační mez 1 pg/ml v séru, statisticky významná odezva oproti blankům.
• Přesnost a opakovatelnost: %RSD < 5 % napříč kalibračními úrovněmi.
• Doba analýzy 6 minut umožňuje vysokou průchodnost vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé a spolehlivé stanovení volného testosteronu pro klinické a výzkumné laboratoře. Miniaturní hmotnostní spektrometr s nízkými nároky na údržbu je vhodný i pro méně zkušené uživatele, zkracuje dobu od analýzy k výsledkům a zvyšuje produktivitu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Vyhodnocení interferencí v různých krevních matricích a optimalizace přípravy.
• Rozšíření metody na další steroidní hormony nebo multiplexní analýzu.
• Další miniaturizace a automatizace pro zvýšení throughput a reprodukovatelnosti.

Závěr

Agilent Ultivo LC/MS prokázal v analýze volného testosteronu v lidské séru vynikající linearitu, citlivost i přesnost v širokém dynamickém rozsahu a s krátkým cyklem analýzy.

Reference

• Analysis of testosterone and dihydrotestosterone in mouse tissues by liquid chromatography-electrospray tandem MS. Anal. Biochem. 2010, 402(2):121-128.