Performance Characteristics of the Agilent 1260 Infinity II Bio-Inert LC

Význam tématu

Biochromatografické aplikace často využívají agresivní mobilní fáze (vysoké koncentrace solí, extrémní pH, denaturační činidla), které vyžadují plně inertní průtokovou cestu. Nesprávné materiály mohou ovlivnit citlivé biomolekuly, zvýšit šum a omezit reprodukovatelnost. Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC přináší kompletně nekovový průtok vzorku, čímž zajišťuje vysokou chemickou odolnost a vynikající přesnost i v náročných bioanalytických podmínkách.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo porovnat výkon nové generace Bio-inert LC systému Agilent 1260 Infinity II se stávajícím 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC za různých provozních režimů:

• konvenční gradientní a izokratické separace na 4,6 a 2,1 mm sloupcích
• rychlé gradienty (<1 min)
• nízkotlaké aplikace proteomických sloučenin (SEC)
• testy injektorové přesnosti (objem, opakovatelnost oblastí, přenos vzorku)
• hodnocení mísících vlastností pumpy (step gradient)
• srovnání standardního a bio-inertního výměníku tepla v termostatu sloupců

Použitá metodika a instrumentace

Pro všechny experimenty byla použita konfigurace Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC:

• Pumpa G5654A, max. tlak 600 bar, průtok až 10 mL/min
• Multisampler G5668A s chlazením vzorků
• Multikolonní termostat MCT G7116A s bio-inertním výměníkem tepla
• Diodový array detektor DAD WR G7115A s bio-inertní tokovou buňkou
• InfinityLab Quick Connect UHPLC fittingy a heat exchangery pro bezodporové spoje

Hlavní výsledky a diskuse

• Retenční čas (RT) – konvenční gradienty: RSD RT <0,04 % (n=7). Rychlé gradienty (~1 min) dosáhly RSD <0,12 %.
• Izokratické běhy: RSD RT <0,06 % (n=7).
• Step gradient (0–100 % B v krocích 10 %): srovnání 1260 Bio-inert Quaternary vs. II Bio-inert ukázalo téměř identické míchací špičky a stabilitu RT.
• Proteiny (SEC, 21 bar): separation BSA a dimeru s RSD RT <0,045 %.
• Injektor – RSD ploch <0,37 % pro 1 µL, <0,42 % pro 0,5 µL. Carryover test (1 000 ng chlorhexidinu): žádné stopy.
• Lineární objemy injekce (0,78–100 µL): RSD plochy <1,45 %.
• DAD WR linearita 1,5–1 600 ng: R² = 0,99995, faktory odezvy v rámci ±5 %.
• Termostat sloupců – bio-inertní vs. standardní heat exchanger: srovnatelná RT reprodukovatelnost při teplotách 10–60 °C pro termolabilní sulfa drogy.

Přínosy a praktické využití metody

Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC poskytuje:

• maximální chemickou odolnost proti vysokým solným koncentracím, extrémnímu pH a denaturačním činidlům
• vysokou přesnost a reprodukovatelnost separací pro HPLC i UHPLC
• flexibilitu při výměně sloupců díky Quick Connect systémům
• dvouzónové Peltierovo chlazení a ohřev sloupců (4 °C – 85 °C)
• minimální riziko carryover a vysokou objemovou přesnost injektoru

Budoucí trendy a možnosti využití

Vědecká komunita se bude soustředit na další rozšiřování Bio-inert technologií:

• integrace s LC-MS systémy pro proteomiku a glykomiku
• automatizované sledování a správa kolonek pomocí RFID
• rozšíření počtu teplotních zón a vytváření gradientů teplot v reálném čase
• miniaturizace průtokového systému pro mikro- a nanolitrové aplikace
• vývoj nových inertních materiálů pro extrémně agresivní chemické prostředí

Závěr

Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC potvrzuje vysokou výkonnost a odolnost v biochromatografii a současně zachovává plnou kompatibilitu se standardními HPLC/UHPLC metodami. Systém vyniká v přesnosti RT i ploch, nízkém carryover, širokém rozsahu průtoků a tlaků a spolehlivém termostatu sloupců.

Reference

1. Schneider S., Performance characteristics of the 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC System, Agilent Technologies Technical Overview, 5990-9194EN, 2011.
2. Agilent Technologies, Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC: Features, Technical Details, Applications and Specifications, Data Sheet 5990-6129EN, 2012.