Seamless Method Transfer from an Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC to an Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC

Význam tématu

Monitorování variací náboje u biotechnologických léčiv, jako je rituximab, je zásadní pro zajištění jejich bezpečnosti a účinnosti. Změny v profilu náboje mohou ovlivnit biologickou aktivitu, farmakokinetiku a imunitní reakce pacienta. Spolehlivá a reprodukovatelná chromatografická metoda umožňuje laboratorím provádět kontroly kvality a porovnání originálních produktů a jejich biosimilárních verzí.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zaměřila na:

• srovnání profilu variací náboje originálního rituximabu (innovator) s biosimilarem;
• ověření přenositelnosti metody mezi dvěma generacemi bio-inertních LC systémů Agilent (1260 Infinity a 1260 Infinity II);
• hodnocení přesnosti retenčních časů a ploch špiček.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci variací náboje byla zvolena slabě kationtová výměnná chromatografie (WCX) s gradientem NaCl v 30 mM fosfátovém pufru pH 6,8. Pufry a gradienty byly počítány a dynamicky míchány pomocí softwaru Agilent Buffer Advisor.
Pro ověření přenositelnosti byly použity dva systémy:

• Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC sestava: quaternární pumpa, autosampler s chlazením, kolonnový termostat, bio-inertní kolona Agilent Bio mAb 2,1 × 250 mm, 5 μm, a DAD detektor.
• Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC sestava: bio-inertní čtyřkomponentní pumpa, multisampler s chlazením, multikolonový termostat a DAD WR detektor.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace pH v rozmezí 6,2 až 7,2 odhalila nejlepší rozlišení při pH 6,8. Při tomto nastavení bylo zjištěno:

• Podobný profil špiček pro originál i biosimilar,
• výrazné rozdíly v intenzitách základních variant (C-terminální lysinové formy),
• retence špiček mezi oběma LC systémy v maximální odchylce < 0,5 %.

Oba systémy vykázaly vysokou preciznost s RSD retenčních časů pod 0,15 % a RSD ploch špiček pod 0,8 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda WCX analýzy variací náboje rituximabu nabízí:

• robustní nástroj pro kontrolu kvality a porovnání originálních a biosimilárních proteinů,
• možnost rychlého přenosu validované metody mezi laboratorními platformami,
• zkrácení času na přípravu pufrů díky dynamickému míchání gradientů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k:

• integrovaným 2D-LC postupům kombinujícím ion-exchange a reverzní fázi pro komplexnější profilování,
• propojení s hmotnostní spektrometrií pro identifikaci modifikací,
• aplikaci strojového učení při optimalizaci chromatografických podmínek.

Závěr

Studie prokázala, že slabě kationtová výměnná chromatografie s dynamickým gradientem na pH 6,8 poskytuje spolehlivou diferenciaci variací náboje rituximabu. Metoda je reprodukovatelná na obou generacích Agilent bio-inertních LC systémů s minimálními odchylkami v retenčních časech a plochách špiček, což potvrzuje její vhodnost pro rutinní QC analýzy biopharmak.

Reference

1. Agilent 1290 Infinity with ISET, Agilent Technologies User Manual, part number G4220-90314, 2015.
2. ICH Topic Q6B Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products.
3. Roy P. S. et al. Comparison of the efficacy and safety of Rituximab (Mabthera) and its biosimilar (Reditux) in diffuse large B-cell lymphoma patients treated with chemo-immunotherapy: A retrospective analysis. Indian J. Med. Paediatr. Oncol. 2013, 34(4), 292–298.
4. Schneider S.; Strassner J. Optimizing protein separations with cation exchange chromatography using Agilent Buffer Advisor, Agilent Technologies Application Note 5991-0565EN, 2012.
5. Schneider S. 2D-LC/MS Characterization of Charge Variants Using Ion Exchange and Reversed-Phase Chromatography, Agilent Technologies Application Note 5991-6673EN, 2016.