Seamless Method Transfer to the Agilent 1290 Infinity II Bio LC System

Význam tématu

Metoda peptide mappingu je zásadní pro charakterizaci aminokyselinové sekvence a posttranslačních modifikací bioléčiv. Robustní a přenositelný LC protokol zajišťuje spolehlivost výsledků napříč laboratorními pracovišti a usnadňuje validaci metod v souladu s ICH Q6B.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo demonstrovat plynulý přenos metody peptide mappingu mezi Agilent 1290 Infinity II LC a novým 1290 Infinity II Bio LC systémem. Studie analyzovala zachování retenčních časů, přesnost měření a srovnání detekce UV a MS pro tryptický digest NISTmAb.

Použitá metodika a instrumentace

Popis metodiky:

• Příprava vzorku NISTmAb zahrnovala denaturaci, redukci, alkylaci a tryptické štěpení.
• Separace probíhala gradientem 0,1 % formic acid v acetonitrilu od 2 % do 97 % během 50 min.
• Detekce byla prováděna UV při 214 nm a MS v režimu All Ions MS/MS.

Použitá instrumentace:

• Agilent 1290 Infinity II Bio LC: Bio High-Speed Pump, Bio Multisampler s termostatem, Multicolumn Thermostat s Bio Quick Connect a bezželezná toková cesta.
• Agilent 1290 Infinity II LC: High-Speed Pump, Multisampler, Multicolumn Thermostat se standardním flow a Quick Connect.
• Detektor UV: Agilent Variable Wavelength Detector s Micro/CMicro Flow Cell VWD.
• MS: Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF, režim All Ions MS/MS, rozsah m/z 100–1700.
• Kolony: ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 (2.1×150 mm, 1.8 µm) + Fast Guard (2.1×5 mm, 1.8 µm).

Hlavní výsledky a diskuse

• Průměrná odchylka retenčních časů mezi systémy byla pouhých 0,17 %, což potvrzuje výbornou kompatibilitu.
• Přesnost retenčních časů (RSD) po 10 injekcích: 0,039 % u Bio LC a 0,073 % u standardního LC.
• Statistická analýza 250 nejhojnějších peptidových signálů ukázala, že až 75 % peaků se lišilo méně než 10 % v intenzitě a průměrná RSD abundancí činila 2,8 %.
• Separace i rozlišení (Rs ~2–4) byly téměř identické na obou systémech.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchý přenos validovaných peptide mappingových metod bez úprav gradientu či kolony.
• Vysoká spolehlivost a reprodukovatelnost pro rutinní analýzy bioléčiv v QA/QC laboratořích.
• Flexibilita volby detekce UV nebo MS s minimálními kompromisy ve výkonnosti.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření bezželezné tokové cesty pro další typy kovově citlivých biomolekul.
• Automatizace přípravy vzorku a zpracování dat pro vysokoprůtokové prostředí.
• Adaptace pro pokročilé PTM a glykomické analýzy.
• Implementace strojového učení pro optimalizaci separačních podmínek a předpověď chování peptidek.

Závěr

Studie prokázala, že Agilent 1290 Infinity II Bio LC umožňuje hladký přenos peptide mappingové metody ve srovnání s konvenčním LC systémem. Výsledky potvrzují vynikající kompatibilitu, stabilitu a flexibilitu detekčních režimů, čímž zaručují ideální platformu pro biofarmaceutické rutinní i výzkumné aplikace.

Reference

1. Agilent Technologies. Agilent 1290 Infinity with ISET. Uživatelský manuál, G4220-90314, 2015.
2. ICH Harmonized Tripartite Guideline Q6B: Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products, 1999.