Analysis of 25-OH Vitamin D2 / D3 in Plasma and Serum by LCMS-8040 using ClinRep LC-MS/MS Complete Kit MS7000
Aplikace | 2013 | ShimadzuInstrumentace
Vitamin D je klíčový biomarker pro hodnocení kostního metabolismu a diagnostiku osteomalacie, rachitidy a osteoporózy. Efektivní a rychlé stanovení 25-OH vitamínu D2 a D3 v plazmě a séru podporuje včasnou detekci deficitu vitamínu D ve klinické praxi.
Cílem studie bylo vyvinout a validovat rychlou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci 25-OH vitamínu D2/D3 za použití kompletního komerčního kitu ClinMass® MS7000. Analýza byla optimalizována tak, aby doba měření nepřekročila 3 minuty a aby byla zajištěna vysoká přesnost a linearita v klinicky relevantním rozsahu koncentrací.
Vzorky (50 μL séra nebo plazmy) byly deproteinovány přidáním 150 μL precipitantu obsahujícího interní standard, po inkubaci a centrifugaci byl do LC injektován supernatant o objemu 50 μL. Chromatografické rozdělení probíhalo izokraticky za použití dvoupumpového systému s pořízením vzorku (Pump SPE) a elucí analytu (Pump MP) při celkovém čase analýzy pod 3 minuty. Detekce byla realizována v režimu MRM při kladné ionizaci APCI.
Metoda poskytuje ostré chromatografické píky D2 a D3 s dobrou reprodukovatelností a separací v čase ≤ 3 minuty. Kalibrační křivky vykazovaly lineární závislost s koeficienty R² > 0,999 v rozsahu 9,29–72,3 ng/mL pro D3 a 4,07–63,2 ng/mL pro D2. Tři kontrolní vzorky lidské séra s nízkou hladinou vitamínu D prokázaly koncentrace 5,5–9,6 ng/mL D3 a pod detekčním limitem pro D2, potvrzující klinickou relevanci metody.
Automatizace přípravy vzorků a integrace on-line SPE mohou dále zvýšit efektivitu analýz. Rozšíření metody o další metabolity vitamínu D a adaptace na multiplexní stanovení více vitaminových a lipidových biomarkerů podpoří komplexní diagnostiku kostního metabolismu.
Navržená LC-MS/MS metoda s použitím kitu ClinMass® MS7000 je rychlá, citlivá a snadno implementovatelná v rutinních klinických laboratořích. Umožňuje spolehlivé stanovení 25-OH vitamínu D2/D3 v plazmě a séru a efektivně odhaluje deficity vitamínu D.
Spotřební materiál, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceShimadzu, RECIPE
Souhrn
Význam tématu
Vitamin D je klíčový biomarker pro hodnocení kostního metabolismu a diagnostiku osteomalacie, rachitidy a osteoporózy. Efektivní a rychlé stanovení 25-OH vitamínu D2 a D3 v plazmě a séru podporuje včasnou detekci deficitu vitamínu D ve klinické praxi.
Cíle a přehled studie
Cílem studie bylo vyvinout a validovat rychlou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci 25-OH vitamínu D2/D3 za použití kompletního komerčního kitu ClinMass® MS7000. Analýza byla optimalizována tak, aby doba měření nepřekročila 3 minuty a aby byla zajištěna vysoká přesnost a linearita v klinicky relevantním rozsahu koncentrací.
Použitá metodika
Vzorky (50 μL séra nebo plazmy) byly deproteinovány přidáním 150 μL precipitantu obsahujícího interní standard, po inkubaci a centrifugaci byl do LC injektován supernatant o objemu 50 μL. Chromatografické rozdělení probíhalo izokraticky za použití dvoupumpového systému s pořízením vzorku (Pump SPE) a elucí analytu (Pump MP) při celkovém čase analýzy pod 3 minuty. Detekce byla realizována v režimu MRM při kladné ionizaci APCI.
Použitá instrumentace
- UHPLC systém Nexera (Shimadzu Europe GmbH)
- Triple kvadrupólový hmotnostní spektrometr LCMS-8040 (Shimadzu)
- Atmosférická tlaková chemická ionizace (APCI)
- Six-port FCV-32AH přepínací ventil
- ClinMass® LC-MS/MS Complete Kit MS7000 (RECIPE Chemicals + Instruments GmbH)
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda poskytuje ostré chromatografické píky D2 a D3 s dobrou reprodukovatelností a separací v čase ≤ 3 minuty. Kalibrační křivky vykazovaly lineární závislost s koeficienty R² > 0,999 v rozsahu 9,29–72,3 ng/mL pro D3 a 4,07–63,2 ng/mL pro D2. Tři kontrolní vzorky lidské séra s nízkou hladinou vitamínu D prokázaly koncentrace 5,5–9,6 ng/mL D3 a pod detekčním limitem pro D2, potvrzující klinickou relevanci metody.
Přínosy a praktické využití metody
- Významně zkrácená doba analýzy podporuje vysokou propustnost vzorků v klinických laboratořích.
- Jednoduchá příprava vzorku a použití komerčního kitu zvyšují reproducibilitu a usnadňují standardizaci metody.
- Vysoká citlivost a linearita umožňují přesné stanovení v širokém rozsahu klinicky významných koncentrací.
Budoucí trendy a možnosti využití
Automatizace přípravy vzorků a integrace on-line SPE mohou dále zvýšit efektivitu analýz. Rozšíření metody o další metabolity vitamínu D a adaptace na multiplexní stanovení více vitaminových a lipidových biomarkerů podpoří komplexní diagnostiku kostního metabolismu.
Závěr
Navržená LC-MS/MS metoda s použitím kitu ClinMass® MS7000 je rychlá, citlivá a snadno implementovatelná v rutinních klinických laboratořích. Umožňuje spolehlivé stanovení 25-OH vitamínu D2/D3 v plazmě a séru a efektivně odhaluje deficity vitamínu D.
Reference
- Grüning A., Engl J. Analysis of 25-OH Vitamin D2 / D3 in Plasma and Serum by LCMS-8040 using ClinRep® LC-MS/MS Complete Kit MS7000. Shimadzu Corporation, First Edition: Sep 2013.
- RECIPE Chemicals + Instruments GmbH. ClinMass® LC-MS/MS Complete Kit MS7000. München, 2013.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Quantification of 25-hydroxyvitamin D2 and D3 in human plasma by liquid chromatography coupled to high-resolution Orbitrap mass spectrometry for clinical research
2019|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE No. 73234 Quantification of 25-hydroxyvitamin D2 and D3 in human plasma by liquid chromatography coupled to high-resolution Orbitrap mass spectrometry for clinical research Authors: Claudio De Nardi1, Katharina Kern2, Steffen Peters2 Thermo Fisher Scientific GmbH, Dreieich, Germany; 2…
Klíčová slova
prm, prmconcentration, concentrationaverage, averagecalculated, calculatedfullms, fullmslevel, levelorbitrap, orbitrapbias, biaslloq, lloqassay, assayexactive, exactivenominal, nominalatmospheric, atmospherichybrid, hybridmin
Vitamin D biomarkers in plasma
2020|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
APPLICATION NOTE 22053 Vitamin D biomarkers in plasma Sensitive, reproducible quantitation with SOLA HRP 30 mg SPE for clinical research Author: Matthew Franklin Thermo Fisher Scientific, Runcorn, UK Keywords: 25-hydroxyvitamin D2, 25-hydroxyvitamin D3, SPE, solid phase extraction, LC, vitamin D,…
Klíčová slova
matrix, matrixthermo, thermobias, biasplasma, plasmascientific, scientificlloq, lloqvitamin, vitaminquantiva, quantivauhplc, uhplcsola, solavanquish, vanquishparameter, parametertsq, tsqcounts, countspolarity
Quantification of 25-hydroxyvitamin D2 and D3 in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research
2019|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 65471 Quantification of 25-hydroxyvitamin D2 and D3 in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research Authors Application benefits Claudio De Nardi, Thermo Fisher Scientific GmbH, Dreieich, Germany • Increased accuracy of method by implementation of…
Klíčová slova
calculated, calculatedaverage, averageassay, assaypercentage, percentageevaluated, evaluatedmethod, methodterms, termsinter, interbias, biasnominal, nominalatmospheric, atmosphericconcentration, concentrationequilibration, equilibrationmin, mincalibrators
Extraction of Fat-Soluble Vitamins from Human Serum Using ISOLUTE® SLE+ Prior to UHPLC/MS-MS Analysis
2020|Waters|Aplikace
Application Note AN945 Extraction of Fat-Soluble Vitamins from Human Serum Using ISOLUTE SLE+ | Page 1 ® Extraction of Fat-Soluble Vitamins from Human Serum Using ISOLUTE SLE+ Prior to UHPLC/MS-MS Analysis ® Figure 1. Structures of Retinol and Beta Carotene…
Klíčová slova
dispense, dispenseair, airgap, gapvitamin, vitaminspiking, spikingsolvent, solventfat, fatvolume, volumetocopherol, tocopherolsle, slesoluble, solublebiotage, biotagepause, pausecarotene, carotenevitamins
