Low level quantitation of Fluticasone and Salmeterol from plasma using LC/MS/MS

Význam tématu

Fluticason a salmeterol tvoří důležitou kombinaci v léčbě astmatu a chronické obstrukční plicní nemoci díky protizánětlivému účinku kortikosteroidu a bronchodilatační aktivitě β2-agonisty. Kvantifikace těchto léčiv v plazmě na ultra nízkých koncentracích je klíčová pro farmakokinetické studie, monitorování terapie, hodnocení biologické dostupnosti a zajištění kvality v preklinickém i klinickém výzkumu.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout citlivou a spolehlivou LC/MS/MS metodu založenou na trojitém kvadrupólu Shimadzu LCMS-8050 s vyhřívaným ESI zdrojem pro simultánní určení fluticasonu a salmeterolu v lidské plazmě na úrovních pg/mL. Klíčové byly nízké limity kvantifikace (LOQ), linearita, opakovatelnost a absence interferencí z komplexního biologického matrice.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnovala:

• Vzorkovací příprava kalibračních roztoků v acetonitril-voda (1:1) a matrix-matched standardů extrahovaných z plazmy pomocí C18 SPE.
• Sušení eluátu dusíkem a rekonstituci v vodě-acetonitrilu (1:1).
• UHPLC separaci na sloupci Shim-pack XR-ODS (50×3 mm, 2.2 μm) s gradientem amonného formiátu a acetonitrilu při 0,3 mL/min a 40 °C.
• Detekci na LCMS-8050 s vyhřívaným ESI, dusíkem jako nebulizačním a sušicím plynem, rychlým přepínáním polarity a skenovací rychlostí až 30 000 u/s.

Hlavní výsledky a diskuse

MRM přechody a retenční časy:

• Fluticason: 501→293 a 501→313, tR≈3,6 min, lineární do r2≥0,999.
• Salmeterol: 416→232, tR≈2,4 min, lineární do r2≥0,998.

Limity kvantifikace:

• Fluticason: LOQ 2 pg/mL v čistém roztoku, 5 pg/mL v plazmě.
• Salmeterol: LOQ 0,5 pg/mL v čistém roztoku, 1 pg/mL v plazmě.

Přesnost (80–120 %) a opakovatelnost (%RSD <20 %) splnily požadavky validace. Chromatogramy neukázaly rušení na retenčních časech analytů.

Přínosy a praktické využití metody

Tato metoda nabízí vysokou citlivost a krátkou dobu analýzy, minimální objem vzorku a jednoduchou přípravu, což ji předurčuje pro farmakokinetické studie, terapeutické monitorování a QA/QC v biomedicínském i farmaceutickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj lze očekávat v automatizaci extrakce, integraci s vysokorozlišovacími spektrometry pro stanovení metabolitů, multiplexních analýzách obdobných farmak a real-time datové analýze v digitálních laboratořích.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda na přístroji Shimadzu LCMS-8050 s vyhřívaným ESI dosažila výjimečné citlivosti a spolehlivosti pro kvantifikaci fluticasonu a salmeterolu v plazmě na úrovních pg/mL. Metoda splňuje požadavky lineární kvantifikace, přesnosti i opakovatelnosti a předkládá komplexní řešení pro bioanalytické aplikace.

Reference

• R. R. Shah et al., International Journal of PharmTech Research, 3(3), 1801–1806 (2011).
• S. Krishnaswami et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 22, 123–129 (2000).