Simultaneous Analysis of Tacrolimus, Sirolimus, Everolimus, and Cyclosporine A in Whole Blood Using an Agilent Ultivo Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Imunosupresiva jako takrolimus, sirolimus, everolismus a cyklosporin A jsou klíčová pro prevenci rejekce transplantačních orgánů a léčbu autoimunitních onemocnění. Přesné a citlivé stanovení jejich koncentrací v celkové krvi je zásadní pro efektivní terapeutické monitorování a zajištění bezpečnosti pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem prezentované studie bylo vyvinout vysoce účinnou a spolehlivou kvantitativní metodu pro simultánní stanovení čtyř imunosupresiv na platformě Agilent Ultivo triple quadrupole LC/MS. Metoda má krátký analytický běh 7,5 minuty a pracuje v režimu „dilute and shoot“, což zkracuje přípravu vzorků a zvyšuje průchodnost analýz.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II Binary Pump (G7112B)
• Agilent 1290 Infinity II Vialsampler (G7129B)
• Agilent 1260 Infinity II Multicolumn Thermostat (G7116A)
• Agilent Ultivo triple quadrupole LC/MS (G6465B) s Agilent Jet Stream ionizačním zdrojem

Použitá metodika

Vzorky: 500 µL whole blood s přídavkem interního standardu, doplněné 975 µL JASEM Reagent-1 a centrifugované při 3 000 rpm po dobu 5 minut. Do HPLC vloženo 20 µL supernatantu.
Chromatografie: analytický kolon JASEM Immunosuppressants, 60 °C, průtok 0,9 mL/min, gradient z mobilní fáze A na B během 7,5 minuty.
Hmotnostní spektrometrie: pozitivní ionizace s MRM režimem, optimalizované přechody pro všechny čtyři látky a odpovídající interní standardy. Parametry zdroje: teplota sušícího plynu 350 °C, 11 L/min; tlak rozprašovače 40 psi; kapilární napětí 3 500 V.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vynikající linearitu (R2>0,995) ve sledovaných rozsazích: takrolimus 0–44 µg/L, sirolimus 0–50 µg/L, everolimus 0–48 µg/L, cyklosporin A 0–1 288 µg/L (cyklosporin A kvadratická křivka). Meze kvantifikace (LOQ) činily 0,16 µg/L u takrolimu, 1,54 µg/L u sirolimu, 1,46 µg/L u everolimu a 1,22 µg/L u cyklosporinu A. Přesnost stanovení (accuracy) se pohybovala mezi 98–103 % a opakovatelnost (RSD) byla nižší než 5 %. Nebyla zjištěna významná kontaminace mezi běhy.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí kratší analýzy a minimální přípravu vzorku, což zvyšuje průchodnost a produktivitu laboratoře. Vysoká citlivost a přesnost umožňují spolehlivé terapeutické monitorování imunosupresiv v klinických i výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj multiplexních metod pro širší spektrum imunosupresiv, integrace automatizované přípravy vzorků a miniaturizace systémů LC/MS. Rostoucí využití pokročilých datových analýz a umělé inteligence může zlepšit interpretaci výsledků a optimalizovat dávkovací režimy pacientů.

Závěr

Vyvinutá 7,5minutová metoda na platformě Agilent Ultivo LC/TQ umožňuje rychlé, citlivé a přesné stanovení čtyř hlavních imunosupresiv ve whole blood. Díky kombinaci JASEM reagencií a optimalizovaných MRM přechodů poskytuje řešení vhodné pro vysokopropustné klinické i výzkumné aplikace.

Reference

• Agilent Technologies. Simultaneous Analysis of Tacrolimus, Sirolimus, Everolimus, and Cyclosporine A in Whole Blood Using an Agilent Ultivo Triple Quadrupole LC/MS. Application Note 5994-2395EN, 2020.