Simplify Your Method Development Using the Agilent 1260 Infinity II Prime LC System and InfinityLab LC/MSD iQ

Význam tématu

Reverzní fázová kapalinová chromatografie spojená s hmotnostní detekcí slouží k ověření funkčnosti systému a kvalitativní detekci látek v laboratorních a průmyslových aplikacích. Rychlá a spolehlivá metoda vývoje zkracuje dobu potřebnou k optimalizaci provozních podmínek a zvyšuje reprodukovatelnost výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo předvést zjednodušený workflow pro vývoj chromatografické metody a hyfenaci s detektorem MS pomocí přístrojového vybavení Agilent 1260 Infinity II Prime LC a InfinityLab LC/MSD iQ. Jako modelová směs byl použit LC/MS 7-analyte system suitability kit pro reverzní fázi.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnovala:

• Screening 112 kombinací kolony (různá chemie povrchu) a mobilních fází (různé pH a složení)
• Automatizované míchání elučních roztoků pomocí BlendAssist a solvent selector ventilu
• Optimalizace koncentrace bufferu (2–10 mM), teploty kolony (40–60 °C)
• Hyphenace s MS v režimu Auto Acquire a SIM pro selektivní detekci

Použitá instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity II Flexible Pump a BlendAssist
• Agilent 1260 Infinity II Multicolumn Thermostat s čtyřpolohovým ventilem
• Agilent 1260 Infinity II Diode Array Detector HS
• Agilent 1290 Infinity Valve Drive se 12-pozicovým solvent selector ventilem
• Agilent InfinityLab LC/MSD iQ (ESI-MS) s Auto Acquire
• Software: Agilent OpenLab CDS

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace odhalila nejlepší chromatografický výkon pro kolonu InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (2,1×50 mm, 1,9 µm) se 10 mM amonného uhličitanu (pH 6,6) a acetonitrilem. Klíčové parametry:

• Minimální rozlišení > 8,4, součet rozlišení až 96,1, symetrie píků 0,54–0,58
• Opakovatelnost retencí: RSD 0,07–0,13 % při 7 opakovaných injekcích
• Teplota 45 °C jako kompromis mezi šířkou píků a tlakem
• Detekce MS (SIM) umožnila selektivní a citlivou analýzu, přičemž intenzita signálu analyzovaných látek kolísala dle ionizační účinnosti

Přínosy a praktické využití metody

• Zkrácení času vývoje metody díky plné automatizaci míchání, výměny kolony a screeningových kroků
• Minimalizace manuálních zásahů a chyb při změně operačních podmínek
• Komplexní ověření systému (UV a MS), včetně citlivosti a rozlišení
• Možnost snadné integrace MS detekce do existujícího LC systému

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace metodologického vývoje povede k rozšířenému využití umělé inteligence pro návrh gradientů a selekci kolony. Vývoj nových povrchových úprav částic a zelených rozpouštědel podpoří rychlou adaptaci metod v biomedicíně, farmaceutickém průmyslu i environmentálních laboratořích. Real-time monitoring systémových parametrů může umožnit prediktivní údržbu a nepřetržitou kvalitu analýz.

Závěr

Představený workflow se osvědčil pro efektivní vývoj reverzní chromatografie s MS detekcí pomocí Agilent 1260 Infinity II Prime a LC/MSD iQ. Optimalizovaná metoda nabízí vysoké rozlišení, reprodukovatelnost a rychlou implementaci v rutinní praxi.

Reference

1. Mutton I. et al. The Design and Use of a Simple System Suitability Test Mix for Generic Reverse Phase HPLC–MS Systems. J Chromatogr A. 2011, 1218(23): 3711–3717.
2. Metzlaff M.; Hörth P. The Agilent 1260 Infinity II Flexible Pump - The Benchmark for High Accuracy and Precision in Low Pressure Mixing Gradient Pumps. Agilent Technologies technical overview 5991-9031EN, 2018.
3. Metzlaff M.; Dickhut C. Agilent 1260 Infinity II Flexible Pump with BlendAssist - Fast Optimization and Simplified Variation of Solvent Composition Using BlendAssist. Agilent Technologies technical overview 5991-9088EN, 2018.