Method Development Tools for More Efficient Screening of Biopharmaceutical Method Conditions Using the ACQUITY Arc Bio SystemPart 2 of 2: Screening SEC and IEX Conditions in a Single Experiment
Aplikace | 2020 | WatersInstrumentace
Rozvoj rychlých a spolehlivých screeningových protokolů je klíčový pro vývoj a validaci biotechnologických analytických metod. Kombinace SEC a IEX v jednom běhu významně zkracuje čas potřebný k optimalizaci podmínek, snižuje spotřebu vzorku a eliminuje ruční přípravu mobilních fází.
Cílem druhé části aplikace je ukázat, jak pomocí systému ACQUITY Arc Bio a technologie Auto•Blend Plus simultánně testovat pH a iontovou sílu pro SEC a IEX. Studie demonstruje výhody přepínání mezi kolonkami a automatického míchání pufrů v jediném experimentu.
Pro screening byl použit analyzát ACQUITY Arc Bio System vybaven CM-A moduly pro přepínání mezi kolonkami. Technologie Auto•Blend Plus zvládá pH i koncentraci soli z čtyř základních zásobních roztoků. Kolonky: XBridge Protein BEH SEC (7,8 × 150 mm, 2,5 µm) a BioResolve SCX mAb (4,6 × 50 mm, 3 µm). Detekce UV/Vis při 280 nm.
SEC: Při nízkém pH (<6,6) a nízké iontové síle (<150 mM NaCl) byla zotavení agregátů nízká, vrchol monomeru byl široký a se značným tailem. Zvýšení pH na 7,0–7,4 a soli na 250–350 mM vedlo ke zúžení vrcholu a lepší rozlišení agregátů (USP rozlišení >2) při přijatelné zotavení.
IEX: Testování pH v rozsahu 6,0–7,4 při gradientu 25–125 mM NaCl ukázalo, že nižší pH (6,2–6,6) poskytuje stabilnější separaci nabitých variant trastuzumabu s dobrou rozlišovací schopností a opakovatelnými plochami vrcholů.
Očekává se rozšíření automatizovaných workflow s umělou inteligencí pro návrh experimentů, integrace dalších typů chromatografických technik (např. HIC, RPC) a využití modulární platformy pro komplexní profiling bioterapeutik.
Systém ACQUITY Arc Bio s Auto•Blend Plus umožňuje efektivní simultánní screening kritických parametrů pro SEC a IEX v jediném pokusu. Takový přístup významně urychlí vývoj robustních a reprodukovatelných metod pro analýzu biotechnologických produktů.
1. Koshel B. M., Birdsall R. E., Yu Y. Q. Method Development Tools for More Efficient Screening of Biopharmaceutical Method Conditions Using the ACQUITY Arc Bio System, Part 2 of 2. Application Note, Waters Corporation, 2020.
HPLC, GPC/SEC
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Rozvoj rychlých a spolehlivých screeningových protokolů je klíčový pro vývoj a validaci biotechnologických analytických metod. Kombinace SEC a IEX v jednom běhu významně zkracuje čas potřebný k optimalizaci podmínek, snižuje spotřebu vzorku a eliminuje ruční přípravu mobilních fází.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem druhé části aplikace je ukázat, jak pomocí systému ACQUITY Arc Bio a technologie Auto•Blend Plus simultánně testovat pH a iontovou sílu pro SEC a IEX. Studie demonstruje výhody přepínání mezi kolonkami a automatického míchání pufrů v jediném experimentu.
Použitá metodika a instrumentace
Pro screening byl použit analyzát ACQUITY Arc Bio System vybaven CM-A moduly pro přepínání mezi kolonkami. Technologie Auto•Blend Plus zvládá pH i koncentraci soli z čtyř základních zásobních roztoků. Kolonky: XBridge Protein BEH SEC (7,8 × 150 mm, 2,5 µm) a BioResolve SCX mAb (4,6 × 50 mm, 3 µm). Detekce UV/Vis při 280 nm.
Hlavní výsledky a diskuse
SEC: Při nízkém pH (<6,6) a nízké iontové síle (<150 mM NaCl) byla zotavení agregátů nízká, vrchol monomeru byl široký a se značným tailem. Zvýšení pH na 7,0–7,4 a soli na 250–350 mM vedlo ke zúžení vrcholu a lepší rozlišení agregátů (USP rozlišení >2) při přijatelné zotavení.
IEX: Testování pH v rozsahu 6,0–7,4 při gradientu 25–125 mM NaCl ukázalo, že nižší pH (6,2–6,6) poskytuje stabilnější separaci nabitých variant trastuzumabu s dobrou rozlišovací schopností a opakovatelnými plochami vrcholů.
Přínosy a praktické využití metody
- Významné zrychlení vývoje metod díky jednotnému screenu SEC a IEX.
- Eliminace ruční přípravy mnoha pufrů a souvisejících chyb.
- Snížení spotřeby vzorku a reagencií.
- Možnost snadného přechodu na delší kolonky nebo jiné pore size pro jemnější optimalizaci.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se rozšíření automatizovaných workflow s umělou inteligencí pro návrh experimentů, integrace dalších typů chromatografických technik (např. HIC, RPC) a využití modulární platformy pro komplexní profiling bioterapeutik.
Závěr
Systém ACQUITY Arc Bio s Auto•Blend Plus umožňuje efektivní simultánní screening kritických parametrů pro SEC a IEX v jediném pokusu. Takový přístup významně urychlí vývoj robustních a reprodukovatelných metod pro analýzu biotechnologických produktů.
Reference
1. Koshel B. M., Birdsall R. E., Yu Y. Q. Method Development Tools for More Efficient Screening of Biopharmaceutical Method Conditions Using the ACQUITY Arc Bio System, Part 2 of 2. Application Note, Waters Corporation, 2020.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Auto•Blend Plus Technology for Ion-Exchange Chromatography Method Development and Robustness Testing
2019|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] Auto•Blend Plus Technology for Ion-Exchange Chromatography Method Development and Robustness Testing Hua Yang, Bill Warren, and Stephan Koza Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS ■■ INTRODUCTION Auto•Blend™ Plus Technology Ion-exchange chromatography (IEX) is widely used…
Klíčová slova
blend, blendauto, autoplus, plussalt, saltmethod, methodvariant, variantrobustness, robustnessinitial, initialtechnology, technologycharge, chargegradient, gradientdevelopment, developmentexchange, exchangeminutes, minutestesting
SIZE-EXCLUSION CHROMATOGRAPHY (SEC) OF PEPTIDES, PROTEINS, AND AAVs
2021|Waters|Příručky
[ APPLICATION NOTEBOOK ] SIZE-EXCLUSION CHROMATOGRAPHY (SEC) OF PEPTIDES, PROTEINS, AND AAVs [ SIZE-EXCLUSION CHROMATOGRAPHY ] [ SIZE-EXCLUSION CHROMATOGRAPHY ] Introduction Gel-permeation chromatography (GPC), size-exclusion chromatography (SEC), and gel-filtration chromatography (GFC) are commonly used terms to describe a liquid chromatographic…
Klíčová slova
sec, secexclusion, exclusionsize, sizeuplc, uplcacquity, acquitychromatography, chromatographyprotein, proteinaggregates, aggregateshplc, hplcdispersion, dispersioncolumn, columnmonomer, monomerigg, iggantibody, antibodybio
Method Transfer of Size-Exclusion and Ion-Exchange Methods for Monoclonal Antibody Analysis from HPLC to the Arc Premier System
2021|Waters|Aplikace
Application Note Method Transfer of Size-Exclusion and IonExchange Methods for Monoclonal Antibody Analysis from HPLC to the Arc Premier System Brooke M. Koshel, David Dao, Robert E. Birdsall, Ying Qing Yu Waters Corporation Abstract Transferring methods between internal laboratories and…
Klíčová slova
arc, arciex, iexpremier, premierchemistries, chemistriesplatforms, platformshplc, hplcequivalency, equivalencymethods, methodsrepeatable, repeatablesec, sectraditional, traditionaltransferring, transferringsystem, systemsimilar, similarbiopharmaceutical
ACQUITY UPLC H-Class Bio System
2011|Waters|Ostatní
ACQUITY UPLC H-Class Bio System Built for your biomolecular characterization t he BIocoM PAt IBle u P lc P lAt FoRM The ACQUITY UPLC® H-Class Bio System – the latest extension to the family of ACQUITY UPLC Systems, brings the…
Klíčová slova
uplc, uplcbio, bioacquity, acquityclass, classsystem, systemblend, blendauto, autominutes, minutesflexibilit, flexibilitplus, pluscharacterization, characterizationmanager, managerprotein, proteinexchange, exchangeheaters
