Rapid development of analytical method for antiepileptic drugs in plasma using UHPLC method scouting system coupled to LC/MS/MS

Význam tématu

Terapeutické monitorování hladin antiepileptik v plazmě je klíčové pro správné dávkování a bezpečnou léčbu pacientů s epilepsií. Moderní UHPLC–MS/MS metody nabízejí vysokou selektivitu a citlivost při jednoduché přípravě vzorku.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a citlivou analytickou metodu pro simultánní kvantifikaci sedmnácti antiepileptik v plazmě za pomoci UHPLC metodního scoutingu spojeného s tandemovým kvadrupólovým hmotnostním spektrometrem.

Použitá metodika a instrumentace

Pro optimalizaci chromatografických podmínek bylo automaticky prohledáno 36 kombinací mobilních fází (10 mM acetátový pufr či formiát, methanol, acetonitril) a čtyř C18 a fluorizovaných kolon pomocí Nexera X2 Method Scouting System (Shimadzu). Detekce probíhala na LCMS-8050 s ESI v pozitivním i negativním režimu a optimalizovanými MRM přechody. Příprava vzorku zahrnovala srážení bílkovin acetonitrilem (plazma:acetonitril 1:4), centrifugaci, ředění supernatantu a injekci 1 µL na kolonu Inertsil ODS-4 (50 × 2,1 mm, 2 µm) při 40 °C a gradientu 3–100 % methanolu během 10 minut.

Hlavní výsledky a diskuse

Z 36 testovaných podmínek byla vybrána kombinace Inertsil ODS-4 a 10 mM acetát–methanol, což umožnilo rozdělení všech látek během 10 minut. Kalibrační křivky vykázaly koeficienty determinace r2 > 0,995. Přesnost a správnost QC vzorků byla v rozmezí ±15 % pro všechna antiepileptika.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zkracuje čas vývoje analýzy, minimalizuje objem vzorku a usnadňuje automatizaci rutinního TDM antiepileptik. Jednoduchá příprava a krátký čas analýzy podporují vysokou propustnost laboratoří.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření systému metodního scoutingu k analýze širších skupin farmak, integrace s datovými platformami a on-line monitoring mohou dále zvýšit efektivitu a kvalitu TDM.

Závěr

Navržená UHPLC–MS/MS metoda založená na metodním scoutingu umožňuje rychlý, citlivý a robustní rozvoj analýzy pro simultánní stanovení sedmnácti antiepileptik v plazmě s vysokou přesností a propustností.