High-Speed Quantitative Analysis of Antiepileptic Drugs Using Triple Quadrupole LC/MS/MS

Význam tématu

Epilepsie patří mezi neurologická onemocnění vyžadující přesné monitorování hladin antiepileptik v krevní plazmě. Rychlá a spolehlivá analýza dovoluje optimalizovat dávkování, minimalizovat nežádoucí účinky a zlepšit kvalitu života pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit možnost kvantitativní analýzy 16 antiepileptik (AEDs) v lidské plazmě bez časově náročné předúpravy vzorku. Studie využívá Shimadzu LCMS-8050 se třemi kvadrupóly pro dosažení 7minutové analýzy s 1µl vstřikem.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy byly připraveny jednoduchou proteino-precipitací a 100násobným ředěním methanolem. Separace probíhala na koloně Inertsil ODS-4 (50×2,1 mm, 2,0 µm) s bifazovým gradientem:

• Fáze A: 10 mM octan amonný
• Fáze B: methanol
• Gradient: 3 % → 90 % → 3 % v časech 0–0,5 min, 3,0–5,0 min, 5,01–7,0 min
• Průtok: 0,4 mL/min, teplota kolony 40 °C, vstřik 1 µL

Hmotnostní spektrometrie probíhala v ESI režimech +4,5 kV a –3,5 kV s následujícími podmínkami:

• Teplota DL: 150 °C, blok ohřevu: 200 °C, interface: 400 °C
• Výtok nebulizačního plynu: 3 L/min, sušící a ohřívací plyn: 10 L/min

Hlavní výsledky a diskuse

Pro všech 16 AEDs byla dosažena vynikající linearita (r2 ≥ 0,995) v rozsahu typických terapeutických koncentrací. Přesnost QC vzorků ve třech hladinách se pohybovala mezi 86 % a 135 % (ve většině případů 90–110 %). Chromatogramy ukázaly dobře rozlišené píky všech analyzovaných látek během 7 minut. Intuitivní zpracování dat pomocí softwaru LabSolutions Quant Browser umožnilo rychlou revizi MRM chromatogramů standardů i QC.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí výrazné zrychlení analýzy bez složité předúpravy vzorků, což usnadňuje rutinní monitorování pacientů a kvalifikovanou QC v klinických laboratořích. Nízký objem vstřiku a minimalizace rozpouštědlové zátěže přispívají k efektivitě provozu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření panelu sledovaných antiepileptik o nové deriváty a metabolity. Integrace s vysoce výkonnou datovou analýzou a automatizovanými systémy předúpravy vzorků dále zvýší propustnost a reprodukovatelnost výsledků. Kombinace s klinickými daty podpoří personalizovanou farmakoterapii.

Závěr

Popsaná metoda LC-MS/MS na přístroji Shimadzu LCMS-8050 poskytuje robustní, rychlou a přesnou kvantifikaci 16 antiepileptik v plazmě bez potřeby komplikované předúpravy. Vysoká linearita, přesnost a efektivita analýzy ji předurčují pro klinické a farmaceutické aplikace.

Reference

Shimadzu Corporation. LAAN-J-LM-E016, First Edition June 2014.