Analysis of Diarrhetic Shellfish Toxins (Okadaic Acid Group) Using Triple Quadrupole LC/MS/MS

Význam tématu

Diarrhetické škeble obsahují toxiny skupiny okadaové kyseliny, které představují riziko pro lidské zdraví při konzumaci kontaminovaných mořských plodů. Spolehlivá instrumentalizovaná metoda pro jejich stanovení umožňuje splnit legislativní limity a nahradit tradiční biologické testy citlivou a kvantitativní analýzu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem publikované aplikace je popsat vývoj a validaci metody LC/MS/MS pro kvantifikaci okadaové kyseliny (OA) a příbuzných dinophysistoxinů (DTX1, DTX2) v mořských plodech. Studie demonstruje parametry lineárnosti, opakovatelnosti a přesnosti měření a aplikuje metodu na certifikovaný referenční materiál z mušle.

Použitá metodika a instrumentace

Pro chromatografii byla použita kolona Shim-pack Scepter C18 (100×2,0 mm, 1,9 µm) s mobilními fázemi:

• Fáze A: voda s 2 mmol/l amonného formiátu a 50 mmol/l kyseliny mravenčí
• Fáze B: acetonitril/voda (95/5, v/v) se stejnými aditivy

Gradientní program z 40 % B na 100 % B a zpět za 17,5 min. Detekce probíhá v režimu ESI negativní ionizace na trojitém kvadrupólu Shimadzu LCMS-8060. Hlavní parametry:

• Tok: 0,2 ml/min, teplota kolony 40 °C
• Objem vstřiku: 5 µl
• MRM přechody: OA 803,30>255,10 a 803,30>113,10; DTX2 stejné přechody; DTX1 817,30>255,10 a 817,30>113,10

Pro extrakci z midgutu hřebenatek byla použita hydrolýza NaOH, následné neutralizace HCl a SPE čištění na polymerním sorbentu.

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární kalibrační křivky v rozsahu 0,1–10 ppb vykázaly koeficient determinace vyšší než 0,999. Opakovatelnost retencí a plošných signálů standardů (1 ppb, n=5) byla lepší než 0,05 % RSD pro časy eluce a 3 % RSD pro plochy. Standard addition na extraktu midgut gland ukázal recoveries 93 % pro OA a 85 % pro DTX1 při RSD ploch 2,29 % a 0,57 % (n=6).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda splňuje požadavky japonské legislativy pro stanovení toxických ekvivalentů OA skupiny, nahrazuje testy na zvířatech a umožňuje spolehlivou kontrolu kvality mořských plodů v rámci QA/QC laboratoří potravinářských provozů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se zvýšené využití hmotnostní spektrometrie s vícečetnou reakcí pro komplexní screening další skupiny mořských toxinů (yessotoxiny, pectenotoxiny). Automace extrakce a pokročilá ionizace mohou zlepšit citlivost a robustnost metody pro složitější matrice.

Závěr

Navržená LC/MS/MS metoda nabízí přesné, reprodukovatelné a legislativně vyhovující stanovení diarrhetických toxinů skupiny okadaové kyseliny. Ukázala vysokou linearitu, opakovatelnost a účinné potlačení maticových vlivů pomocí standard addition.

Reference

• Ministerstvo zdravotnictví Japonska, Oznámení 0306 č. 2 (2015)
• Oznámení č. 37 „Testing for Diarrhetic Shellfish Toxins“ (1981)
• Oznámení 0308 č. 2 a 0308 č. 9 (2017)