Analysis of Diarrhetic Shellfish Toxins (Okadaic Acid Group) Using Triple Quadrupole LC/MS/MS

Význam tématu

Analýza toxinu okadaové kyseliny a jejích analogů je zásadní pro zajištění bezpečnosti konzumace mlžů. Regulace stanovená ministerstvem zahájila přechod od testu na myších na instrumentální metody. LC MS MS umožňuje citlivou a rychlou detekci skupiny OA, chrání spotřebitele a splňuje legislativní limity.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem je představit validovaný postup pro kvantifikaci okadaové kyseliny a dinophysistoxinů DTX1 a DTX2 v mořských plodech. Studie demonstruje přesnost, linearitu a opakovatelnost metody v souladu s ministerskými dokumenty Notice 0306 No 2 a Notice 0308 No2 a No9.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrarychlá kapalinová chromatografie se tandemovou hmotnostní spektrometrií na instrumentu triple quadrupole. Kolona Shim pack Scepter C18 o rozměru 100 × 2,0 mm a částicích 1,9 μm. Mobilní fáze A voda s amonnou solí a kapalná kyselina formová, fáze B acetonitril voda 95 5 v poměru. Gradient od 40 do 100 procent B. Detekce ESI v negativním režimu s MRM přechody 803,30>255,10 a 113,10 pro OA a DTX2, 817,30>255,10 a 113,10 pro DTX1. Průtok 0,2 ml minut a teplota kolony 40 °C.
Vzorky se zpracovávají neutralizačně‐hydrolýzou v roztoku NaOH při 76 °C, následně SPE polymerní kolonkou a hexanovou očistou. Pro stanovení se používají certifikované referenční materiály NMIJ AIST pro OA a DTX1 a CRM NRC Kanada pro DTX2.

Hlavní výsledky a diskuse

Retenční časy a plochy píků vykazují RSD do 3 %. Kalibrační křivky v rozsahu 0,1 až 10 ppb dosahují koeficientu determinace vyššího než 0,999. Vzorky škeble vykazují vliv matrice, proto byla využita metoda standardního přídavku. Obnovení analytů v referenčním materiálu v midgut gland dosahuje 93 % pro OA a 85 % pro DTX1 s RSD plochy pod 2,3 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje rychlou a spolehlivou alternativu k bioasay, umožňuje splnit regulatorní požadavky při kontrole kvality mořských plodů. Je vhodná pro rutinní laboratoře QA QC a výzkumná pracoviště.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření na další skupiny škodlivých toxinů jako pectenotoxiny a yessotoxiny. Využití vysoce rozlišovací hmotnostní spektrometrie, automatizace vzorkování a rozvoj on‐site screeningových zařízení. Vývoj víceanaly­tických metod pro komplexní profilaci toxických metabolitů.

Závěr

Popsaná LC MS MS metoda pro skupinu okadaové kyseliny nabízí vysokou citlivost, linearitu a opakovatelnost. Splňuje současné legislativní požadavky a nahrazuje testy na živých organismech přímou instrumentální analýzou.

Reference

• Notice 0306 No 2 ministerstva MH LW z března 2015 – instrumentální analýza škeblových toxinů
• Notice 0308 No 2 a No 9 z března 2017 – revize testu pro diarrhetické toxiny
• NMIJ AIST certifikované materiály pro OA a DTX1
• NRC Kanada CRM DTX2