Analysis of Diarrhetic Shellfish Toxines

Význam tématu

Diarrhetic shellfish toxins (DST) představují skupinu lipofilních toxinů, které mohou kontaminovat mlže a způsobit u člověka vážné potravinové otravy. Mezi nejznámější patří okadaická kyselina (OA) a dinofyzistoxiny (DTX1, DTX2). Spolehlivé a citlivé analytické metody pro jejich detekci jsou klíčové pro zajištění bezpečnosti mořských plodů v potravinářském průmyslu.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout a ověřit metodiku pro rychlou separaci a kvantifikaci DST pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie v kombinaci s hmotnostní spektrometrií (HPLC-MS/MS). Studie demonstruje optimalizované chromatografické podmínky, výběr kolony a gradientní program pro dosažení robustního rozlišení a citlivosti.

Použitá metodika a instrumentace

• Chromatografie
  Reversed-phase LC se sloupcem Shim-pack Scepter C18 (100 mm × 2,0 mm I.D., 1,9 μm); kolona udržována na 50 °C.
  Mobilní fáze A: voda s 2 mmol/L formiátu amonného a 50 mmol/L kyseliny formiové.
  Mobilní fáze B: acetonitril/voda (95/5, v/v) se stejnými přísadami.
  Gradient: 40 % B (0–2,5 min) → 100 % B (7,5–12,5 min) → 40 % B (12,51–17,5 min); průtok 0,2 mL/min; injekce 5 μL; předřazený ventilem pro přívod do MS v rozmezí 6–10 min.
• Hmotnostní spektrometrie (MS)
  Elektrosprayová ionizace (ESI) v negativním režimu.
  MRM přechody: OA 803,30 > 255,10; DTX2 803,30 > 255,10; DTX1 817,30 > 255,10.
  Parametry: nebulizační plyn 3 L/min, sušicí plyn 5 L/min, ohřívací plyn 15 L/min, teplota DL 150 °C, BH 450 °C, IF 350 °C, CID 325 kPa, napětí sondy –3,0 kV.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila separaci všech tří toxinů do 10 minut s dostatečným rozlišením. Retenční časy se pohybovaly přibližně 6,2 min (OA), 7,5 min (DTX2) a 8,3 min (DTX1). Citlivost a selektivita MRM monitoringu zajišťují detekční limity na úrovni nízkých ng/mL. Aplikace ventilu minimalizuje znečištění MS mimo analyzované okénko.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé a reprodukovatelné stanovení DST v mořských plodech.
• Vysoká citlivost vhodná pro monitorování bezpečnosti potravin.
• Robustní systém pro rutinní analýzu v laboratorních i průmyslových podmínkách.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj metodiky může směřovat k multiplexnímu monitoringu širšího spektra mořských toxinů pomocí vysoce účinných kapalinových systémů a moderních hrubě rozlišených hmotnostních analyzátorů. Kombinace s automatizovanou extrakcí a zpracováním dat významně zvýší throughput a spolehlivost analýz.

Závěr

Popsaná HPLC-MS/MS metoda na bázi Shim-pack Scepter C18 kolony nabízí rychlou, citlivou a robustní analýzu okadaické kyseliny a dinofyzistoxinů ve vzorcích měkkýšů. Díky optimalizovanému gradientu a MRM detekci je zabezpečeno spolehlivé monitorování DST v potravinářských kontrolách.

Reference

• Application News C200 (JP, EN), Shimadzu Corporation, First Edition: Sep. 2023, ERAS-1000-0531.