Simultaneous Analysis of Etizolam, Triazolam, and Their Metabolites in Biospecimens Using LCMS™-9030

Význam tématu

Simultánní stanovení benzodiazepinů etizolamu a triazolamu včetně jejich hlavních metabolitů je klíčové pro forenzní toxikologii, klinické testování i dopravní kontrolu. Přesná detekce těchto látek v biologických matricích zvyšuje spolehlivost toxikologických výsledků a usnadňuje soudní i zdravotní rozhodovací procesy.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo navrhnout a ověřit metodu pro současné stanovení etizolamu, triazolamu, α-hydroxyetizolamu, α-hydroxytriazolamu a 4-hydroxytriazolamu v lidské krvi a plazmě. Použití ultra-vysokotlaké kapalinové chromatografie ve spojení s vysokorozlišujícím Q-TOF hmotnostním spektrometrem umožnilo selektivní měření izomerických metabolitů s minimální interferencí.

Použitá metodika a instrumentace

UHPLC podmínky:

• Systém: Shimadzu Nexera X2
• Kolona: YMC-Triart C18 (1,9 μm, 50 × 2 mm)
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, B: 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu
• Gradientní program: 20–95 % fáze B během 13 min, průtok 0,6 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 2 μL

MS podmínky:

• Systém: Shimadzu LCMS-9030 (Q-TOF)
• Ionizace: ESI pozit.
• Proud mlhovacího plynu 3 L/min, zahřívací plyn 10 L/min, sušící plyn 5 L/min
• Teploty: interface 300 °C, DL 250 °C, heat block 400 °C

Příprava vzorků:
QuEChERS extrakce z 100 μL krve či plazmy pomocí acetonitrilu a extrakčních solí, centrifugace a přímé měření supernatantu. Spike and recovery test proveden při koncentraci 10 ng/mL.

Hlavní výsledky a diskuse

Extrahované iontové chromatogramy s výřezem ±2 mDa pro každou složku prokázaly rozlišení izomerických párů α-hydroxyetizolam/α-hydroxytriazolam a etizolam/triazolam. Linearita kalibračních křivek (1–100 ng/mL) dosáhla koeficientu R² ≥ 0,999. Obnovitelnost stanovení se pohybovala mezi 105–115 % pro krev a 117–131 % pro plazmu. Relativní odchylky hmotnosti zůstaly v rozmezí –0,29 až +0,35 mDa, což potvrzuje stabilitu měření bez vlivu matrice.

Přínosy a praktické využití

• Zvýšená selektivita a citlivost pro forenzní toxikologii
• Možnost aplikace v klinickém monitoringu a dopravních testech
• Robustní kvantifikace v komplexních biologických matricích

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na širší spektrum benzodiazepinů a jejich metabolitů, implementovat automatizaci přípravy vzorků a využití strojového učení pro rychlou interpretaci dat. Další směřování představuje miniaturizace a vysokokapacitní analýzy pro klinické i forenzní laboratoře.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-HRMS metoda pro simultánní analýzu etizolamu, triazolamu a jejich metabolitů nabízí vysokou přesnost, linearitu a reprodukovatelnost. Metoda je vhodná pro forenzní i klinické aplikace vyžadující spolehlivé stanovení benzodiazepinů v krevních matricích.