Analysis of Favipiravir in Human Plasma

Význam tématu

Favipiravir je inhibitor RNA polymerázy používaný k léčbě virových infekcí. Přesná analýza jeho koncentrace v lidské plazmě je klíčová pro farmakokinetické studie, monitorování léčby a vývoj nových antivirotik.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat spolehlivý LC-MS/MS postup pro kvantifikaci favipiraviru v lidské plazmě. Výzkum zahrnoval optimalizaci chromatografických a hmotnostních podmínek, přípravu kalibrační křivky a ověření přesnosti, přesnosti a stability metody.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Nexera X2
• Analytická kolona Shim-pack Scepter C18-120 (50 mm × 2,1 mm, 1,9 µm)
• Hmotnostní spektrometrie LCMS-8060 s Heated ESI rozhraním

Použitá metodika

Příprava vzorků:

• Odebraná plazma s EDTA
• Přidání 20 µl 75% isopropanolového roztoku, 50 µl plazmy, 10 µl interní standardní [13C,15N]-favipiraviru a 200 µl acetonitrilu
• Promíchání, odstředění a přenos supernatantu do autosamplerové lahvičky

Chromatografické podmínky:

• Mobilní fáze A: 0,05 % kyseliny mravenčí ve vodě; B: 0,05 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu
• Gradient: 5 % B (0–0,3 min), vzestup na 30 % B (0,35 min), 90 % B (1,5–2,5 min), návrat na 5 % B (2,6–4,0 min)
• Průtok 0,4 ml/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 1 µl

Hmotnostně-spektrometrické podmínky:

• MRM režim, kladná ionizace
• Favipiravir: kvantifier 157,7→85,1 m/z, qualifier 157,7→113,2 m/z
• [13C,15N]-favipiravir: kvantifier 159,7→85,1 m/z, qualifier 159,7→113,2 m/z
• Teplota heat blocku 400 °C, DL 250 °C, rozhraní 300 °C, nebulizační plyn 3 l/min, vysoušecí plyn 10 l/min, zahřívací plyn 10 l/min

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka pro rozmezí 1–100 µg/ml vykázala výbornou linearitu (R2=0,9998). Precize metody (RSD) se pohybovala mezi 1,7 a 6,5 %, přesnost mezi 96 a 103 %. Intra- a mezi-denní opakovatelnost potvrdily stabilní výsledky s RSD do 5,2 % a přesností 89–104 %. Stabilita systému při 100 po sobě jdoucích injekcích prokázala RSD 2,9 % pro favipiravir a 3,2 % pro interní standard.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje citlivou a selektivní kvantifikaci favipiraviru v matriči lidské plazmy. Je vhodná pro farmakokinetické studie, monitorování dodržování léčby i podporu vývoje nových antivirotik díky výborné robustnosti a reprodukovatelnosti.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metody na analýzu metabolitů favipiraviru a další antivirové sloučeniny. Integrace s automatizací předpřípravy vzorků a využití vysoce výkonných hmotnostních analyzátorů může dále zvýšit propustnost a citlivost analýz.

Závěr

Vyvinutý LC-MS/MS postup pro analýzu favipiraviru v lidské plazmě nabízí vysokou přesnost, precizi a výbornou stabilitu. Metoda splňuje požadavky pro farmakokinetické a klinické aplikace.

Reference

1. Shim-pack Scepter C18-120 kolona, Nexera X2 UHPLC, LCMS-8060 (Shimadzu Corporation)
2. Imoto E, Kawakami D. Analysis of Favipiravir in Human Plasma. Application No. C229. Shimadzu Corporation, First Edition Oct. 2020.