Quantitative Analysis of Favipiravir Spiked in Plasma Using by HPLC

Význam tématu

V době pandemie COVID-19 se favipiravir jeví jako perspektivní antivirotikum s nutností přesného sledování plazmatických koncentrací za účelem optimalizace dávkování a minimalizace nežádoucích účinků. Standardní metody využívající hmotnostní spektrometrii mohou být nákladné a složité, proto je vyvíjena alternativa založená čistě na HPLC s fluorescence detekcí.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo navrhnout a validovat kvantitativní HPLC metodu pro stanovení favipiraviru v lidské plazmě bez použití MS detekce. Metoda měla dosáhnout vysoké citlivosti, přesnosti i reprodukovatelnosti v rozmezí 1–100 μg/mL.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy byly deproteinizovány přidáním methanolu (plazma : methanol 1 : 4), centrifugací a následným 15násobným ředěním mobilní fází. Chromatografie probíhala na přístroji Nexera XR s kolonou Shim-pack Scepter C18-120 (150×4,6 mm, 5 μm) a guard kolonou Shim-pack Scepter C18-120G (10×4,0 mm, 5 μm). Mobilní fáze A byla 10 mmol/l fosfátový buffer pH 6,9, B methanol. Průtok 1,0 ml/min, injekční objem 1,0 μl, teplota 30 °C. Detekce fluorescence při excitaci 360 nm a emisi 433 nm. Gradient byl řízen ve čtyřech krocích v čase 0–9,51 min směrem z čisté fáze A k čisté fázi B.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka v rozsahu 1–100 μg/mL vykázala lineárnost R2 = 0,999 (vážení 1/C). Intradení přesnost (%RSD) se pohybovala mezi 0,21–0,31 %, přesnost metody podle QC vzorků mezi 0,18–0,35 %, a přesnost (accuracy) v rozsahu 92,1–106 % (přijatelné limity ±8 % pro kalibraci, ±4 % pro QC). Chromatogramy prokázaly dobrou rezoluci favipiraviru bez interferencí z plazmatických složek.

Přínosy a praktické využití metody

• Metoda nevyžaduje drahé MS vybavení, stačí běžné HPLC s fluorescence detektorem.
• Rychlá a jednoduchá příprava vzorku skrze deproteinizaci a ředění.
• Vysoká citlivost a spolehlivost umožňuje rutinní terapeutický monitoring favipiraviru v klinických a výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může směřovat k automatizaci přípravy vzorků, validaci metody pro jiné biologické matice (moč, sérum) nebo k multiplexnímu stanovení favipiraviru společně s jinými antivirotiky. Integrace s LC-MS/MS by umožnila rozšíření analytického rozpětí a selektivity.

Závěr

Navržená HPLC-fluorescence metoda nabízí robustní, citlivé a cenově dostupné řešení pro kvantifikaci favipiraviru v plazmě bez nutnosti hmotnostní spektrometrie. Validace potvrdila vynikající linearitu, přesnost a opakovatelnost, což podporuje aplikaci metody v klinickém monitoringu a výzkumu.

Reference

1. Gowen BB, et al. Alterations in favipiravir (T-705) pharmacokinetics and biodistribution in a hamster model of viral hemorrhagic fever. Antiviral Res. 2015.
2. Takashita E, et al. Antiviral susceptibility of influenza viruses isolated from patients pre- and post-administration of favipiravir. Antiviral Res. 2016.
3. Shiraki K, et al. Favipiravir, an anti-influenza drug against life-threatening RNA virus infections. Pharmacol Ther. 2020.