High Resolution Fast LC - Easier Than You Think

Význam tématu

Metoda vysokorozlišovací rychlé kapalinové chromatografie (Fast LC) umožňuje podstatné zkrácení doby analýzy při zachování nebo zvýšení separační účinnosti. Tento přístup najde uplatnění v moderních laboratořích, kde je klíčová vysoká propustnost vzorků (throughput), nižší spotřeba mobilní fáze a rychlé rozhodovací procesy v průmyslové a farmaceutické analytice.

Cíle a přehled studie

Cílem prezentace je:

• Ukázat přínosy zkrácení délky a průměru kolon, snížení velikosti těsnicích částic a zvýšení teploty či průtoku mobilní fáze.
• Demonstrace rychlých LC postupů na běžném HPLC vybavení.
• Diskuse instrumentálních výzev: vyšší tlaky, malé objemy píků, potřeba rychlého datového sběru.

Použitá metodika a instrumentace

Platforma: konvenční HPLC systémy Agilent (1100, 1200 SL RRLC), detektory DAD (80 Hz), VWD (55 Hz) a MS (Agilent 6140). Kolony: sub-2 µm a superficiálně porézní částice (Poroshell 120, dp 2,7 µm) v rozměrech 4,6×150 až 1,0×30 mm. Autoinjektory Agilent ALS, chromatografická celka pěti tlakových čerpadel (binární i kvaternární), termostat kolony.

Hlavní výsledky a diskuse

• Zkrácení délky kolon a redukce dp zachovává rozlišení (ΔtR/w) při 2×–10× zrychlení běhů.
• Superficially porézní kolony dosahují ~90 % účinnosti sub-2 µm částic za 40–50 % tlaku.
• Příklady: separace 15 analgetik na 3×100 mm kolóně 1,8 µm za 2 min a na Poroshell 120 2,7 µm za obdobný čas.
• Rychlost průtoku, zkrácení gradientního času a zvýšení teploty (35–60 °C) umožňují redukci doby analýzy o 40 % a snížení tlaku o 25 %.
• Rychlost datového sběru ≥10 Hz uplatnitelná pro úzké píky 0,6 s (4σ).

Přínosy a praktické využití metody

Implementace rychlé LC na stávajících HPLC systémech přináší nižší spotřebu rozpouštědel, vyšší kapacitu analýzy, snížení rozšíření píků a zefektivnění vývoje metod i rutinní kontroly kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace UHPLC a rychlých detektorů pro proteomiku či metabolomiku.
• Další vývoj superficiálně porézních a hybridních částic pro nižší tlak a vyšší účinnost.
• Automatizované úpravy gradientních a izokratických metod dle kolony a matrice vzorku.

Závěr

Vysokorozlišovací rychlá LC představuje flexibilní přístup pro moderní chromatografii. Kombinace zkrácených kolon, menších částic, optimalizovaného průtoku, teploty a rychlého sběru dat umožňuje výrazně zkrátit analýzy bez kompromisu v kvalitě separace.

Reference

• Majors, L. et al.: Are you getting the most out of your HPLC column? LC/GC, Dec 2003, 21(12), pp. 1124–1133.
• Joseph, J. et al.: The Influence of Sub-Two Micron Particles on HPLC Performance. Agilent publ. 5988-9251EN.
• The LC Handbook. Agilent Pub. No. 5990-7595EN.
• Agilent HPLC Maintenance Guide. Pub. No. 5988-2662ENUS.