Compliant attribute monitoring for biopharmaceutical product quality attributes employing intact mass analysis

Význam tématu

Liquid chromatography–mass spectrometry (LC-MS) je klíčová metoda v biopharmaceutickém výzkumu, umožňující detailní sledování produktových kvalitativních atributů (PQA) biologik. Více atributová metodologie (MAM) pro analýzu intact mass přináší výhody v podobě snížené manipulace se vzorkem, rychlejšího zpracování a možnosti souběžného monitoringu četných modifikací bílkovin.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje použití SCIEX OS Software 1.7 pro implemen­taci compliant intact mass MAM workflow. Hlavním cílem je ukázat kompletní software řešení od akvizice dat až po kvantifikaci a sledování PQA v souladu s regulačními požadavky.

Použitá metodika a instrumentace

Postup zpracování:

• Vzorky adalimumabu na koncentraci 0,1 mg/mL v deionizované vodě.
• Chromatografie pomocí ExionLC se sloupcem Agilent PLRP-S (2,1×50 mm, 300 Å, 5 µm) při 80 °C.
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě, fáze B: 0,1 % kyselina mravenčí v acetonitrilu. Gradient viz tabulka 1 v textu.
• MS akvizice na SCIEX X500B QTOF s Turbo V Ion Source a Twin Sprayer ESI.

Parametry MS:

• pozitivní režim, Gas 1/2: 60 psi, Curtain Gas: 30 psi, teplota 550 °C, ion spray voltage 5500 V
• TOF m/z rozsah 400–4000, akumulace 0,5 s, collision energy 10 V

Hlavní výsledky a diskuse

• SCIEX OS Software 1.7 umožňuje automatizovanou rekonstrukci intact mass spekter bez předdefinice sekvence.
• Definice atributů: zadání očekávané molekulové hmotnosti, m/z, retenčního času a rozsahu rekonstrukce.
• Využití pokročilých parametrů rekonstrukce (počet iterací, S/N threshold, krok hmotnosti) pro přesnou kvantifikaci.
• Flexibilní výpočty na úrovni skupin atributů, např. součet glykoform a procentuální rozdělení.
• Nastavení individuálních ak­ceptačních kritérií pro každý atribut a pas/fail flagging.
• Rychlé zpracování dávky vzorků (≥2 současně) s přehlednou výsledkovou tabulkou obsahující XIC, raw a recon spectra.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšení propustnosti a minimalizace rizika vzniku PTM při přípravě vzorku.
• Komplexní sledování více atributů v jediném běhu testu, nahrazující nebo doplňující tradiční QC testy.
• Plná compliant implementace v jedné platformě od akvizice dat po statistickou analýzu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření principu intact MAM na nové třídy biologik a subjednotkové analýzy.
• Integrace strojového učení pro automatickou detekci odchylek a optimalizaci parametrů.
• Reálné časové monitorování výrobního procesu a on-line QC.
• Vývoj cloudových a síťových řešení pro vzdálený přístup a sdílení výsledků.

Závěr

SCIEX OS Software 1.7 představuje kompletní a uživatelsky přívětivou platformu pro intact mass MAM analýzu, která spojuje vysokou propustnost, flexibilitu metody a plnou kompatibilitu s regulatorními normami. Tato workflow umožňuje účinné sledování a kvantifikaci PQAs, čímž podporuje výzkum a kvalifikaci biopharmaceutik.

Reference

1. Rogers RS et al. (2018). A View on the Importance of “Multi-Attribute Method” for Measuring Purity of Biopharmaceuticals and Improving Overall Control Strategy. The AAPS Journal, 20, Article 7.