Evaluation of Critical Attributes on Different Lots of Adalimumab Using BPV Flex Software 1.0.1

Význam tématu

Charakterizace a monitoring kritických kvalitativních atributů bioterapeutik je klíčová pro zajištění bezpečnosti pacientů a účinnosti léčby. Analýza intaktní hmotnosti a subjednotek proteinových terapeutik, jako je adalimumab, poskytuje platformní přístup k hodnocení heterogenity, distribuce glykoform a konzistence mezi výrobními šaržemi.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat použití softwaru BPV Flex 1.0.1 ve spojení se systémem SCIEX X500B QTOF pro vysokoprůchodovou analýzu intaktního adalimumabu a jeho subjednotek připravených enzymatickým štěpením IdeS. Studie zahrnovala porovnání čtyř výrobních šarží za účelem sledování a kvantifikace klíčových atributů, zejména distribuce glykoform a posttranslačních modifikací.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorky: Intaktní adalimumab na koncentraci 0,1 µg/µl; subjednotky vznikající štěpením IdeS a redukcí TCEP.
• Chromatografie: ExionLC s kolonou PLRP-S (2,1×50 mm, 300 Å, 5 µm) při 80 °C; mobilní fáze A – 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, fáze B – 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu; průtok 0,5 ml/min podle gradientu.
• Hmotnostní spektrometrie: SCIEX X500B QTOF s TwinSpray iontovým zdrojem v TOF-MS modu; parametry zahrnovaly GS1 a GS2 po 60 psi, trysku 5500 V, teplotu 550 °C (intaktní) a 500 °C (subjednotky).
• Zpracování dat: BPV Flex 1.0.1 s definicí molekuly (sekvence, disulfidické vazby, očekávané modifikace), parametry rekonstrukce (práh signálu, rozlišení, iterace) a cíleným sledováním hmotností.

Hlavní výsledky a diskuse

• Intaktní analýza ukázala, že dominantní glykoforma G0F/G0F dosahuje přibližně 41 %.
• Vyhodnocení C-terminálních lyzin potvrdilo převládající odštěpení lyzinu během procesu zpracování.
• Subjednotková analýza pomocí IdeS odhalila nejen biantennární glykany, ale i nízkoodborné vysokomannózní formy Man5, Man6 a Man7.
• Srovnání čtyř šarží prokázalo konzistentní distribuci hlavních glykoform: G0F (~60 %), G1F (~15 %), G2F a Man5/G1 kolem 4–5 % (CV < 10 %).
• BPV Flex umožňuje přímé srovnání surových a rekonstruovaných spekter, interaktivní filtrování a generování sloupcových grafů i podrobných tabulek.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé platformní nasazení v kontrolních laboratořích vývoje i komerční výroby mAb.
• Automatizované dávkové zpracování vzorků s individuálními parametry pro každou sekvenci.
• Úspora času díky možnosti porovnání výsledků bez opakovaného měření.
• Flexibilní definice cílových proteoform a jejich relativních abundancí podporuje agilní řízení kvality a životního cyklu produktu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace pokročilé automatizace a umělé inteligence pro prediktivní monitoring kritických atributů.
• Rozšíření sledování modifikací o další posttranslační změny a nekovalentní interakce.
• Propojení s on-line procesní analytikou (PAT) pro kontinuální kontrolu výroby v reálném čase.
• Adaptace platformy pro diagnostické a point-of-care aplikace v klinických podmínkách.

Závěr

Použití softwaru BPV Flex 1.0.1 ve spojení se systémem SCIEX X500B QTOF představuje efektivní a vysoce throughputovou strategii pro sledování a srovnání kvalitativních atributů adalimumabu. Tento přístup podporuje konzistenci výroby, zjednodušuje pracovní postupy a zajišťuje robustní kontrolu kvality během celého životního cyklu bioterapeutika.

Reference

• Nayoung Lee, Gwangmin Park a kol. Evaluation of similar quality attribute characteristics in SB5 and reference product of adalimumab. mAbs, Volume 11, 2019.