USP-Compliant Analysis of Vitamin in Dietary Supplement : Analysis of Cyanocobalamin by Nexera™ XR

Význam tématu

Vitamin B12 je nezbytný pro tvorbu červených krvinek a energetický metabolismus. Vzhledem k tomu, že lidský organismus jej sám syntetizovat nedokáže a jeho zásoby v potravinách rostlinného původu jsou nízké, hrozí u populací s omezeným přívodem riziko deficitu. Analytická kontrola obsahu cyanocobalaminu v doplňcích stravy je proto klíčová pro zajištění kvality a bezpečnosti finálních produktů.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl ukázat validní HPLC metodu podle USP40-NF35 pro stanovení cyanocobalaminu s vysledováním system suitability parametrů. Součástí je porovnání výkonnosti moderního systému Nexera XR se sérií Prominence a aplikace metody na komerčně dostupnou multivitamínovou tabletu.

Použitá metodika a instrumentace

Analýza probíhala na přístroji Shimadzu Nexera XR a pro srovnání na sérii Prominence. Použitá kolona byla C18 (150×4,6 mm, 5 μm; USP kód L1). Mobilní fáze složená z methanolu a vody v poměru 35:65 s průtokem 0,5 mL/min a teplotou kolony 20 °C. Vzorek se vnášel objemem 200 μL (s přídavným vzorkovacím smyčkou 500 μL). Detekce se uskutečňovala pomocí PDA při 550 nm.

Předúprava vzorku komerční tablety probíhala takto:

• Odměření a rozdrcení tablet na prášek
• Vložení do odměrné centrifugační zkumavky a doplnění 40 mL vody
• Protřepání při pokojové teplotě po dobu 2 minut
• Centrifugace při 3000 ot/min po dobu 5 minut
• Filtrace získaného extraktu a přímá analýza HPLC

Hlavní výsledky a diskuse

System suitability test ukázal relativní standardní odchylku (%RSD) pro retenční čas 0,122 % a pro plochu píku 0,867 %, což splňuje limit USP40-NF35 (≤3 %). Chromatogram standardního roztoku a komerčního extraktu prokázal shodu retenčního času a absorpčního spektra. V komerčním přípravku bylo stanoveno 0,44 μg cyanocobalaminu na tabletu na systému Nexera XR a 0,49 μg na systému Prominence, obě hodnoty spadají do rozsahu 90–150 % deklarovaného obsahu.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a reprodukovatelná analýza vitaminu B12 v souladu se standardem USP
• Široká aplikovatelnost jak na moderní systém Nexera XR, tak na zavedenou sérii Prominence
• Jednoduchá předúprava vzorku vhodná pro rutinní kontrolu kvality doplňků

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším směrem je automatizace předúpravy vzorku včetně on-line extrakcí a možnost multiplexní analýzy dalších vitamínů v jednotné metodice. Výhledově lze integrovat HPLC s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity a citlivosti stanovení.

Závěr

Metoda HPLC na systému Nexera XR prokázala vysokou přesnost, opakovatelnost a shodu s USP standardy. Výsledky jsou plně kompatibilní se starší sérií Prominence, což umožňuje bezproblémovou integraci do existujících laboratorních postupů.

Reference

1. National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition, informace o vitaminu B12
2. United States Pharmacopeia 40: „Oil and Water Soluble Vitamins with Mineral Tablets Cyanocobalamin“