Quantitation of acetylcholinesterase inhibitors

Význam tématu

Quantifikace inhibitorů acetylcholinesterázy je klíčová pro klinický výzkum onemocnění nervosvalového přenosu, jako je myasthenia gravis, a pro monitorování léčivých a toxických sloučenin. Vysoce citlivé a selektivní analytické metody umožňují detekci stopových koncentrací látek ve složitém biologickém matriálu, což je nezbytné pro správné dávkování léčiv a posouzení farmakokinetiky.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní UHPLC-MS/MS metodu pro stanovení neostigminu, pyridostigminu a edrofonia v lidské plazmě v rozsahu 0,050–50 ng/mL. Metoda měla minimalizovat matriční efekty, dosáhnout vysoké zotavitelnosti analytů a umožnit krátký analytický běh (3,25 min) s vynikající separací a tvarovými parametry píků.

Použitá metodika a instrumentace

V nylčištěním vzorku bylo použito pevné fáze extrakce (SPE) s sorbentem SOLA WCX 30 mg, uplatňujícím režim slabé kationtové výměny. Vzorek plazmy byl naředěn pufrem (pH 7) a prošel krokem kondenzačního promývání (ACN/HCOOH, MeOH, voda) a následnou eluční fází (ACN/HCOOH). Koncentrovaný extrakt byl reconstitutován a injektován do LC.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Horizon System (binary pump, split sampler HT, aktivní předhřívač, kolonna teplota 30 °C)
• Kolona: Accucore Polar Premium 100 × 2,1 mm, 2,6 µm (amide-embedded C18, kompatibilní s 100 % vodou)
• MS/MS: Thermo Scientific TSQ Altis Triple Quadrupole s H-ESI zdrojem (pozitivní režim, všechny SRM kanály s kvantifikačním i potvrzovacím iontem)
• SPE: SOLA WCX 30 mg/3 mL cartridges a HyperSep 24-port vakuový manifold

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizovaná UHPLC-MS/MS metoda umožnila separaci všech tří inhibitorů během 3,25 min s limitem kvantifikace 0,050 ng/mL. Accucore Polar Premium kolona vykázala ostré píky a vysokou účinnost. Matriční efekty byly velmi nízké (matriční faktor normalizovaný interním standardem ~1,05–1,09). Zotavitelnosti analytů dosahovaly 91–105 %. Kalibrační křivky měly lineární oblast a koeficient R2 >0,994 pro všechny analyty. Presnost a reprodukovatelnost (CV) byly <8,3 % ve všech QC úrovních.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost, selektivitu a krátký analytický čas, což umožňuje efektivní analýzu velkého počtu klinických vzorků. Robustní SPE protokol s vysokou naložitelností sorbentu SOLA WCX 30 mg snižuje riziko ucpávání a selhání extrakce u viskózních biologických matric.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze snadno adaptovat na stanovení dalších kationtových sloučenin v biologických vzorcích. Dalším trendem je automatizace vzorkovacího workflow a integrace s vysoce výkonnými hmotovými spektrometry pro simultánní kvantifikaci širšího spektra terapeutik a jejich metabolitů.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda s využitím SPE SOLA WCX 30 mg a Accucore Polar Premium kolony poskytuje vynikající citlivost, selektivitu a reprodukovatelnost pro kvantifikaci acetylcholinesterázových inhibitorů v lidské plazmě. Výsledky potvrzují vhodnost této platformy pro klinické a farmakokinetické studie.

Reference

1. Taylor C. Quantitation of acetylcholinesterase inhibitors utilizing the high loading capacity of SOLA WCX 30 mg in plasma for clinical research. Thermo Fisher Scientific Application Note 22054; 2020.