Analysis of plant stanyl fatty acid esters in enriched margarine using an on-line coupled Agilent 1220 Infinity LC-7890 GC system

Význam tématu

Analýza rostlinných stanyl mastných esterů v potravinách je klíčová pro kontrolu obsahu sloučenin s prokázanými účinky na snižování hladiny cholesterolu. Vzhledem k rostoucímu zájmu o funkční potraviny se vyžaduje rychlá, citlivá a reprodukovatelná metoda umožňující flexibilní stanovení těchto esterů v matricích s vysokým obsahem tuku, jako je margarín.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo ověřit možnost přímé analýzy rostlinných stanyl mastných esterů v obohacené margaríně bez časově náročné off-line frakční separace. Pro tento účel byl využit online spojený systém Agilent 1220 Infinity LC a 7890A GC, který umožňuje frakcionaci a následnou kapilární GC analýzu v jednom uzavřeném běhu.

Použitá metodika a instrumentace

Sample preparation:

• Odebírka 20–40 mg margarínu, přidání interního standardu cholesterylpalmitátu (750 μg).
• Extrahováno směsí n-hexan/MTBE (3:2) za přítomnosti Na2SO4, sonikace, filtrace a ředění 1:5.

Chromatografické podmínky:

• LC: Eurospher-100Si 250×2 mm, 5 μm; mobilní fáze n-hexan/t-butylmetyléter (96:4); tok 0,2 mL/min; injekce 2 μL; detekce UV při 205 nm.
• Přenos LC-frakce do GC prováděn pomocí 2p/6p ventilu a multimode inlet v režimu solvent vent.
• GC: Restek Rtx-200MS 30 m × 0,25 mm, tenkostěnná vrstva 0,1 μm; vodík jako nosný plyn; FID detektor při 360 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

Online LC-GC systém vykázal:

• Vynikající linearitu kalibrace pro devět stanyl esterů (R2 = 0,995–0,999).
• Vysokou opakovatelnost měření (CV pod 9 % při desetinásobných injekcích).
• Stabilní rozlišení i po více než 600 přenosech, bez známek zanášení kapilár.
• Celkový obsah stanolových esterů v margarínu ~13,3 g/100 g produktu.

Přínosy a praktické využití metody

Online LC-GC přináší následující výhody:

• Eliminace off-line předsélekce (TLC, SPE) – úspora času a redukce manipulačních chyb.
• Snížení rizika ztráty vzorku a kontaminace díky uzavřenému systému.
• Jednodušší provoz a vyšší robustnost vhodná pro rutinní analýzy v průmyslových a výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování a aplikace:

• Rozšíření detekčního rozsahu pomocí hmotnostní spektrometrie, umožňující identifikaci stopových neznámých esterů.
• Automatizace přípravy vzorku a integrace do vysokoprůtokových rutin QC.
• Adaptace protokolu na další funkční složky v potravinách, jako jsou fytosteroly, karotenoidy nebo vitaminy.

Závěr

Online spojený systém Agilent LC-GC poskytuje rychlé, přesné a reprodukovatelné stanovení rostlinných stanyl mastných esterů v obohaceném margarínu bez potřeby off-line frakcionace. Metoda je vhodná pro rutinní kontrolu kvality funkčních potravin a nabízí široké možnosti dalšího rozvoje.

Reference

1. A. Barnsteiner et al., GC-Based Analysis of Plant Stanyl Fatty Acid Esters in Enriched Foods, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2011, 59(10), 5204–5214.
2. P. Dugo, G. Dugo, L. Mondello, On-line coupled LC-GC: theory and applications, LC–GC Eur., 2003, 16(12a), 35–43.
3. T. Hyötyläinen, M.-L. Riekkola, On-line coupled liquid chromatography–gas chromatography, J. Chromatogr. A, 2003, 1000(1-2), 357–384.
4. R. Esche et al., Two-dimensional chromatography: LC–GC online coupling of an Agilent 1260 Infinity LC and an Agilent 7890A GC, Agilent Technical Overview, 2011, 5990-8025EN.