Automated determination of THC contents in human urine

Význam tématu

Analýza metabolitů THC v lidské moči je zásadní pro forenzní testování, farmakokinetické studie, kontrolu pracovníků i vyšetřování řízení pod vlivem drog. Přesné a citlivé metody zajišťují spolehlivost výsledků v oblasti medicínského i právního rozhodování.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie je demonstrovat plně automatizované stanovení Δ9-tetrahydrokanabinolu a jeho metabolitů THC-OH a THC-COOH v moči s detekčním limitem v nižším ng rozsahu. Využití systému FREESTYLE SPE umožňuje minimalizovat manuální zásahy a zvýšit propustnost laboratoře.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnuje:

• Příprava vzorku: 5 ml moči spíkované standardním roztokem, alkalická hydrolýza (NaOH 10 M, 60 °C, 15 min) a úprava pH na 6–7
• Solid-phase extraction: CHROMABOND HR-X, 3 ml, 200 mg; předkondice, naložení vzorku, promytí (methanol-voda 3:7), sušení a eluice (hexan-ethylacetát-octová kyselina 75:25:1)
• Automatizace: FREESTYLE SPE (LCTech) s předdefinovanými kroky pro kondici, naložení, promytí, eluici, kapacita až 15 rozpouštědel
• Eluent exchange: úplné odpaření pod dusíkem, rehydratace v metanolu
• HPLC-MS/MS: Dionex Ultimate 3200 s ABSciex 3200; NUCLEOSHELL RP18 (2,7 µm, 50×2 mm), gradientní eluce voda/acetonitril 0,1 % kyseliny mravenčí, průtok 0,3 ml/min, injekce 5 µl, ESI+ s MRM přechody

Hlavní výsledky a diskuse

Obě metody (manuální i automatizovaná) vykázaly vysoké návratnosti:

• THC: manuálně 80 ± 3 %, automatizovaně 90 ± 9 %
• THC-OH: manuálně 77 ± 10 %, automatizovaně 80 ± 6 %
• THC-COOH: manuálně 98 ± 8 %, automatizovaně 93 ± 8 %

Automatizace vedla k mírně vyšším nebo srovnatelným návratnostem se sníženým rizikem chyby a vyšší reprodukovatelností.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizované SPE zkracuje časovou náročnost, snižuje manuální chyby a zvyšuje propustnost analýz. Metoda je vhodná pro forenzní laboratoře, klinickou toxikologii i kontrolu zaměstnanců.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další integrace automatizace s LC-MS, rozšíření o další drogy, miniaturizace postupů a aplikace v reálném čase či ve vzdáleném monitoringu.

Závěr

Plně automatizované stanovení THC a jeho metabolitů v moči pomocí FREESTYLE SPE a HPLC-MS nabízí spolehlivou, citlivou a vysoce propustnou metodu, která splňuje nároky moderních laboratoří.

Reference

1. Huestis MA Simultaneous GC-EI-MS Determination of Δ9-THC and Metabolites in Human Urine J Anal Toxicol 2007 31(8) 477-485
2. Gorelick DA Heishman SJ Methods in Molecular Medicine Marijuana and Cannabinoid Research Humana Press 2005 235-253
3. Guy GW Whittle BA Robson PJ The Medicinal Uses of Cannabis and Cannabinoids Pharmaceutical Press 2004
4. Blake DR Robson P Ho M Jubb RW McCabe CS Preliminary Assessment of Cannabis-Based Medicine in Rheumatoid Arthritis Rheumatology 2006 45(1) 50-52
5. Kemp MP Abukhalaf IK Manno JE Manno BR Alford D McWilliams ME Nixon FE Fitzgerald MJ Reeves R Wood M Cannabinoids in Humans II J Anal Toxicol 1995 19 292-298