Purify with Ease Using Mass-Based Fraction Collection with InfinityLab Pro iQ and OpenLab CDS

Význam tématu

Sběr frakcí v kapalinové chromatografii umožňuje cílenou izolaci a purifikaci analytů z komplexních směsí, což je stěžejní v syntetické chemii, kontrolách kvality i přírodovědných studiích. Masově řízená frakční kolekce (MBFC) s využitím hmotnostní spektrometrie zvyšuje citlivost a selektivitu oproti UV detekci, čímž usnadňuje získání vysoce čistých látek.

Cíle a přehled studie / článku

Tato aplikace ukazuje, jak sestava Agilent 1290 Infinity II Preparative LC/MSD s detektorem InfinityLab Pro iQ Plus a softwarem OpenLab CDS umožňuje automatickou MBFC flavonových glykosidů z extraktu z černého bezu (Sambucus nigra). Představuje nastavení metody, detekci aduktů a vyhodnocení získaných frakcí.

Použitá metodika a instrumentace

K separaci a frakční kolekci byla použita soustava Agilent:

• Preparativní LC/MSD systém 1290 Infinity II
• Jednokvadrupólový detektor InfinityLab Pro iQ Plus
• OpenLab CDS verze 2.8 FP02
• Prep 100Å C18 kolona, 10 × 50 mm, 5 µm
• ESI zdroj s nastavením 300 °C, 13 L/min, 35 psi, 4000 V
• Flow splitter (1500:1), makeup solvent 70/30 H2O/ACN + 0,1 % FA
• SIM monitorování aduktů [M+H]+, [M+Na]+, [M–H]–

Chromatografický gradient 5–98 % acetonitrilu s 0,1 % TFA, 7 mL/min, UV detekce 270 nm, injekce 700 µL.

Hlavní výsledky a diskuse

Z extraktu černého bezu bylo automatizovaně izolováno pět hlavních flavonových glykosidů: rutin, izokvercetin, kaempferol 3-rutinosid, isorhamnetin 3-rutinosid a isorhamnetin 3-glukosid. Frakce sbírané v čase 7,3–7,6 min potvrdily vysokou selektivitu MBFC. Analýza ukázala in-source fragmentaci rutinu na izokvercetin, což neovlivnilo čistotu získaných frakcí díky vhodnému nastavení prahové hodnoty a monitorování aduktů.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená selektivita i u spektrálně podobných sloučenin
• Automatizovaná správa aduktů a generování reportů v OpenLab CDS
• Neomezený počet cílových složek pro routinní frakční kolekce
• Rychlá implementace do existujících workflow a vyšší produktivita laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s vysoce rozlišovacími (HR) MS systémy
• Propojení s automatizovanými purifikačními moduly a bioassay
• Rozšířené aplikace v přírodovědném výzkumu a farmaceutické výrobě
• Využití strojového učení pro optimalizaci detekčních parametrů

Závěr

Systém MBFC s InfinityLab Pro iQ Plus a OpenLab CDS prokázal efektivní a reprodukovatelnou izolaci cílových flavonoidů z komplexního přírodního extraktu. Automatizace metodiky a vyhodnocení dat významně zjednodušuje workflow a zvyšuje spolehlivost výsledků.

Reference

1. Improve the Productivity of Purification Workflows. Agilent Technologies technical overview, publication number 5994-8532EN, 2025.
2. Study of the Glycosylated Secondary Metabolites in Tea (Camellia sinensis L.) Using UHPLC/Q-TOF/MS, Agilent Technologies application note, publication number 5991-8066EN, 2017.