Method transfer and optimization of deoxycholic acid analysis using HPLC-CAD

Význam tématu

Analýza deoxycholové kyseliny a cholové kyseliny je důležitou součástí kvality farmaceutických přípravků podle monografie USP. HPLC s nabitým aerosolovým detektorem umožňuje univerzální detekci látek bez chromoforů, poskytuje vysokou citlivost a reprodukovatelnost a minimalizuje spotřebu rozpouštědel.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo přenést a optimalizovat stávající USP monografii pro deoxycholovou kyselinu z detektoru Vanquish CAD H na novější Vanquish CAD HP. Studie se zaměřila na úpravu klíčových parametrů: hodnoty výkonové funkce (PFV) vs. výkonové hodnoty (PV), teploty odpařování (EvapT) a nastavení digitálního filtru.

Použitá metodika a instrumentace

Pro stanovení byla použita následující instrumentace a chemikálie:

• UHPLC systém Thermo Scientific Vanquish Flex s Quaternary Pump F, Split Sampler FT a Column Compartment H
• Detektory: Vanquish Charged Aerosol Detector H a HP (P/N VH-D20-A, VH-D21-A-01)
• Kolona: Thermo Scientific Acclaim 120 C18, 4,6 × 150 mm, 3 µm
• Fáze mobilní: A – 0,1% kyselina mravenčí ve vodě, B – 0,1% kyselina mravenčí v acetonitrilu, gradientní běh 25→100% B za 35 min
• Parametry CAD: sběrná frekvence 20 Hz, EvapT 50 °C, digitální filtr 5 s
• Příprava standardů: zásobní roztok 1 mg/mL v methanolu/vodě 80/20, kalibrační řady 0,0005–0,01 mg/mL

Hlavní výsledky a diskuse

System suitability test potvrdil vynikající opakovatelnost (<3 % RSD) a vysoké S/N (>200 pro HP, >148 pro H). Optimalizace PV ukázala nejvyšší linearitu (R² = 1,000) při PV 1,8 (odpovídá PFV 1,2 u CAD H). Ideální EvapT 50 °C poskytlo konzistentně vysoké S/N s nízkým rizikem termické degradace. Filtr s konstantou 5 s zajistil rovnováhu mezi potlačením šumu a zachováním ostrosti špiček.

Přínosy a praktické využití metody

• Bezproblémový přenos USP monografie mezi CAD generacemi bez změny chromatografického protokolu
• Úspora času a rozpouštědel díky možnosti současného měření až čtyř PV kanálů na HP
• Zajištění požadované přesnosti, citlivosti a linearity vhodné pro QA/QC laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj CAD metod povede k automatizaci optimalizace parametrů pomocí umělé inteligence, širší aplikaci multi-analyzátorových protokolů a integraci do laboratorních informačních systémů. Přístroje s vícekanálovou detekcí umožní komplexní profilaci biologicky aktivních látek v reálném čase.

Závěr

Metoda USP pro deoxycholovou kyselinu byla úspěšně převedena z Vanquish CAD H na HP detektor. Optimalizace PV, EvapT a filtru zajistila vysokou výkonost a spolehlivost. Vanquish CAD HP nabízí rychlejší přenos dat, lepší S/N a možnost simultánního měření více PV úrovní.

Reference

1. USP-NF Deoxycholic Acid, United States Pharmacopeial Convention, 2024
2. B. Bailey et al., Guidelines for method transfer and optimization, Thermo Fisher Scientific TN71290, 2017
3. P. Gamache et al., Charged aerosol detection – use of the power function and robust calibration practices, TN73299, 2019
4. K. Lovejoy et al., Deoxycholic acid method transfer from Corona Ultra RS to Corona Veo/Vanquish CAD, AN72600, 2018
5. B. Bailey et al., Practical Use of CAD in Charged Aerosol Detection for Liquid Chromatography, Wiley, 2017