Deoxycholic acid method transfer from the Corona ultra RS Charged Aerosol Detector to the Corona Veo (or Vanquish) Charged Aerosol Detector

Význam tématu

Deoxycholová kyselina je důležitým primárním žlučovým kyselinou s významným uplatněním ve farmaceutickém průmyslu a biochemickém výzkumu. Přesné stanovení čistoty a obsahu deoxycholové kyseliny se proto stalo nepostradatelnou součástí QA/QC procesů a farmakopoeálních metod.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo přenést kompeniální HPLC metodu USP 40–NF 35 pro stanovení deoxycholové kyseliny z detektoru Corona ultra RS CAD na novější generaci detektorů Corona Veo CAD či Vanquish CAD a ověřit jejich ekvivalenci.

Použitá metodika a instrumentace

Analýza probíhala na systému Thermo Scientific Vanquish Flex Quaternary UHPLC s detektorem nabitých aerosolů (CAD).

Ultrafialová chromatografie:

• Kolona: Acclaim 120 C18, 4,6×150 mm, 3 µm
• Mobilní fáze A: 0,1 % formiová kyselina ve vodě
• Mobilní fáze B: 0,1 % formiová kyselina v acetonitrilu
• Gradient: 75→45→58→100→75 % B v čase 0→2→14→24→35→38 min
• Průtok: 1,0 mL/min; teplota kolony: 30 °C; objem injekce: 25 µL

Přístroje CAD:

• Corona ultra RS CAD (P/N 70-9406)
• Corona Veo CAD/Vanquish CAD (P/N 5081.0010)

Příprava vzorků a standardů proběhla ve složení 80/20 metanol/voda; pracovní koncentrace 0,0005–0,01 mg/mL.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace parametrů CAD stanovila Power Function Value (PFV) na 1,20, teplotu odpařování (Evap T) na 50 °C a digitální filtr na 5 s. Obě detekční konfigurace splnily kritéria přesnosti (%RSD <3 %) a citlivosti (S/N >10 pro 0,0005 mg/mL). Linearita kalibrace vážené 1/plocha² prokázala vynikající korelaci s R² >0,9997.

Přenos metody ověřila stanovení deoxycholové kyseliny ve dvou typech vzorků, přičemž výsledky na obou detektorech byly ekvivalentní a splňovaly kompeniální limity 97–103 %. Kvantifikace nečistot potvrdila, že celkový obsah nečistot zůstal pod hranicí 2 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje robustní a citlivé stanovení deoxycholové kyseliny v souladu s USP monografií. Novější Corona Veo/Vanquish CAD poskytuje srovnatelnou či mírně lepší citlivost a stabilnější signál, což usnadňuje rutinní QA/QC analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj CAD technologie otevře cestu k rozšíření kompeniálních postupů na další žlučové kyseliny a slabě ionizovatelné látky. Standardizace přenosu metod mezi různými generacemi detektorů podporuje flexibilitu a efektivitu analytických laboratoří.

Závěr

Přenos USP HPLC–CAD metody pro deoxycholovou kyselinu z Corona ultra RS CAD na Corona Veo/Vanquish CAD proběhl úspěšně. Obě konfigurace splňují požadavky na přesnost, linearitu i citlivost. Nový detektor umožňuje konzistentní analýzy s možností další optimalizace pro širší spektrum analytů.

Reference

• Bailey B, Gamache PH, Acworth IN. Guidelines for Method Transfer and Optimization – from Earlier Model Corona Detectors to Corona Veo Detectors. Thermo Fisher Scientific TN157; 2014.
• Bailey B, Plante M, Thomas D, Crafts C, Gamache PH. Practical Use of CAD – Achieving Optimal Performance. In: Charged Aerosol Detection for Liquid Chromatography and Related Separation Techniques. Wiley; 2017. p. 163–189.
• US Food and Drug Administration. Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation; 2001.
• Gamache PH, Kaufman SL. Principles of Charged Aerosol Detection. In: Charged Aerosol Detection for Liquid Chromatography and Related Separation Techniques. Wiley; 2017. p. 3–65.