The INTACT Mass Application in waters_connect™ Platform Streamlines ADC DAR and Drug Distribution Analysis

Význam tématu

Antibody–drug konjugáty (ADC) představují moderní třídu cílené onkologické léčby, kde je klíčovým kritériem kvality přesné stanovení poměru počtu molekul léčiva navázaných na molekulu protilátky (DAR) a distribučního profilu konjugátů. Robustní a automatizované workflow pro LC–MS analýzu ADC usnadňuje nejen vývoj, ale i validaci a následné testování výrobků pro klinické aplikace.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem Application Note je představit INTACT Mass App verze 1.9 v rámci waters_connect™ platformy pro automatizované výpočty DAR a rozložení konjugovaných forem ADC. Studie demonstruje schopnosti softwaru na dvou licencovaných ADC vzorcích: cystein-konjugovaném ENHERTU™ a lysin-konjugovaném KADCYLA™.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu intact ADC byly využity dvě hlavní separační techniky a LC–MS konfigurace:

• Native SEC–MS na BioAccord Systemu pro zachování nativní struktury ADC.
• Denaturační RPLC–MS po PNGase F deglykosylaci pro lysin-konjugované ADC s cílem zjednodušit spektrální komplexitu.
• Software INTACT Mass App ver. 1.9 na waters_connect Informatics Platformě pro automatizovanou dekonvoluci, přiřazení neživých a konjugovaných forem, výpočet DAR a distribučního profilu.

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza ENHERTU™ prokázala přítomnost převážně osmi navázaných molekul léčiva (D8) s vypočteným DAR 7,97. Distribuce ostatních forem byla zanedbatelná. U KADCYLA™ denaturační RPLC–MS analýza deglykosylovaného vzorku ukázala široké rozložení D0–D8 s průměrným DAR 3,56. Porovnání s nativním SEC–MS vzorkem potvrdilo velmi podobné distribuční profily a DAR 3,50, což odpovídá literárním údajům.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizované přiřazení konjugovaných forem a výpočty DAR ve verzi 1.9 INTACT Mass App minimalizují manuální zásahy a riziko chyb, výrazně zkracují dobu zpracování dat a zajišťují kompatibilitu s regulatorními požadavky. Workflow lze aplikovat od rané charakterizace až po rutinní testování kvality ADC ve výrobním prostředí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace o podporu dalších typů konjugátů a multimodálních bioterapeutik. Důležitým krokem bude integrace umělé inteligence pro predikci konjugovaných forem a prediktivní modelování stability ADC během vývoje. Kombinace s dalšími orthogonalními technikami (ion mobility, HDX–MS) umožní komplexnější pohled na strukturální heterogenitu.

Závěr

INTACT Mass App verze 1.9 v rámci waters_connect platformy poskytuje plně automatizované, přesné a regulatorně kompatibilní řešení pro analýzu DAR a distribučního profilu ADC. Demonstrace na ENHERTU™ a KADCYLA™ potvrzuje spolehlivost a flexibilitu workflow pro různé separační a napouštěcí podmínky LC–MS.

Reference

1. Shion H. et al. INTACT Mass: Rapid Mass Confirmation and Purity Assessment of Biotherapeutics. Waters Application Note, 2022.
2. Doneanu C.E. et al. LC–MS Analysis of siRNA and Guide RNA Using BioAccord with INTACT Mass App. Waters Application Note, 2022.
3. D’Esposito R.J. et al. RNA CQA Analysis Using BioAccord LC–MS and INTACT Mass. Waters Application Note, 2023.
4. Ranbaduge N. et al. Streamlined LC–MS of Synthetic Peptide Impurities via BioAccord and INTACT Mass. Waters Application Note, 2022.
5. Riccardi F. et al. A Comprehensive Overview on Antibody–Drug Conjugates. Front. Pharmacol., 2023;14.
6. Shion H. et al. Analysis of ADCs by Native MS on the BioAccord System. Waters Application Note, 2019.
7. Martín M. et al. Trastuzumab Deruxtecan in Breast Cancer. Crit. Rev. Oncol. Hematol., 2024;198:104355.
8. Chen L. et al. Structural Characterization of Kadcyla and Its Biosimilar. mAbs, 2016;8(7):1210–1223.