Reliable Purification of Full-Length Product and Enhanced Isolation and Detection of Impurities With Ready to Use XBridge Premier Oligonucleotide BEH™ C18 OBD™ Preparative Columns
Aplikace | 2025 | WatersInstrumentace
Syntetické oligonukleotidy představují perspektivní třídu léčiv zaměřených na genetické poruchy. Klíčovým krokem ve vývoji těchto léčiv je spolehlivá purifikace cílové sekvence i přidružených nečistot, které je třeba izolovat pro toxikologické studie a zajištění bezpečnosti a účinnosti konečného produktu.
Cílem aplikacní poznámky bylo porovnat běžné nerezové preparativní kolony se zařízeními vybavenými povrchy MaxPeak HPS v iontově párkové reverzní fázi (IP-RP). Studie se zaměřila na izolaci a detekci raně eluovaných nečistot z 20-mer oligonukleotidu, sledovala opakovatelnost elučních profilů a účinnost frakční kolony při prvních injekcích.
Byla aplikována preparativní IP-RP chromatografie s gradientním eluačním systémem (voda/ACN) a iontovým párem TEAA. Krudový vzorek byl frakcionován ve dvouminutových intervalech a každá frakce podrobena analytické IP-RP-UV/MS kontrole.
Komponenty vybavené MaxPeak HPS povrchem prokázaly:
Metoda umožňuje přesnější profilování nečistot, minimalizuje ztráty vzorku a zkracuje dobu přípravy kolony. Přímá a předvídatelná škálovatelnost z analytických na preparativní kolony zvyšuje efektivitu vývojových a výrobních procesů v oligonukleotidových laboratořích.
Nasazení MaxPeak HPS upravených preparativních kolon výrazně zlepšuje spolehlivost a reprodukovatelnost purifikace oligonukleotidů, zejména při izolaci raně eluovaných nečistot. Tím snižuje riziko zkreslení výsledků toxikologických studií a urychluje vývoj bezpečných a účinných syntetických oligonukleotidových léčiv.
1. Villiger L. et al. Nat Rev Mol Cell Biol. 2024;25:464–487.
2. Nakamura M. et al. Nat Cell Biol. 2021;23:11–22.
3. Minkner R. et Wätzig H. Electrophoresis. 2022;43:2402–2427.
4. Gilar M. et al. J Chromatogr A. 2021;1650:462247.
Spotřební materiál, LC kolony, PrepLC, LC/MS
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Syntetické oligonukleotidy představují perspektivní třídu léčiv zaměřených na genetické poruchy. Klíčovým krokem ve vývoji těchto léčiv je spolehlivá purifikace cílové sekvence i přidružených nečistot, které je třeba izolovat pro toxikologické studie a zajištění bezpečnosti a účinnosti konečného produktu.
Cíle a přehled studie
Cílem aplikacní poznámky bylo porovnat běžné nerezové preparativní kolony se zařízeními vybavenými povrchy MaxPeak HPS v iontově párkové reverzní fázi (IP-RP). Studie se zaměřila na izolaci a detekci raně eluovaných nečistot z 20-mer oligonukleotidu, sledovala opakovatelnost elučních profilů a účinnost frakční kolony při prvních injekcích.
Použitá metodika
Byla aplikována preparativní IP-RP chromatografie s gradientním eluačním systémem (voda/ACN) a iontovým párem TEAA. Krudový vzorek byl frakcionován ve dvouminutových intervalech a každá frakce podrobena analytické IP-RP-UV/MS kontrole.
Použitá instrumentace
- Preparativní systém: Waters Analytical Scale Purification System se dvěma Quaternary Solvent Manager-R pumpami, 3767 Sample Manager, CM-30S Column Manager a 2489 UV/Vis detektorem.
- Analytický systém: ACQUITY UPLC I-Class PLUS s RDa detektorem, řízený softwarem waters_connect; pro hmotnostní detekci MassLynx s FractionLynx.
Hlavní výsledky a diskuse
Komponenty vybavené MaxPeak HPS povrchem prokázaly:
- Vyšší obnovu raně eluovaných nečistot až o 100 % ve srovnání s nerezovým hardwarem.
- Konzistentní eluační profil již od první injekce bez nutnosti předběžné pasivace.
- Detekci unikátních hmotnostních signatur nečistot, které se na běžné nerezové koloně ztrácely.
Přínosy a praktické využití metody
Metoda umožňuje přesnější profilování nečistot, minimalizuje ztráty vzorku a zkracuje dobu přípravy kolony. Přímá a předvídatelná škálovatelnost z analytických na preparativní kolony zvyšuje efektivitu vývojových a výrobních procesů v oligonukleotidových laboratořích.
Budoucí trendy a možnosti využití
- Rozšíření povrchových úprav podobných MaxPeak HPS na další typy chromatografických materiálů.
- Integrace s vysokorozlišovacími hmotnostními analyzátory pro hloubkovou charakterizaci nečistot.
- Automatizované workflow pro paralelní purifikaci a analýzu nečistot v jedné platformě.
Závěr
Nasazení MaxPeak HPS upravených preparativních kolon výrazně zlepšuje spolehlivost a reprodukovatelnost purifikace oligonukleotidů, zejména při izolaci raně eluovaných nečistot. Tím snižuje riziko zkreslení výsledků toxikologických studií a urychluje vývoj bezpečných a účinných syntetických oligonukleotidových léčiv.
Reference
1. Villiger L. et al. Nat Rev Mol Cell Biol. 2024;25:464–487.
2. Nakamura M. et al. Nat Cell Biol. 2021;23:11–22.
3. Minkner R. et Wätzig H. Electrophoresis. 2022;43:2402–2427.
4. Gilar M. et al. J Chromatogr A. 2021;1650:462247.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Method Development for Preparative Purification of Long Oligonucleotides
2025|Waters|Aplikace
Application Note Method Development for Preparative Purification of Long Oligonucleotides Alexander Todorova, Stella VerkhnyatSkayaa, Imke Nijdama, Martin Gilarb, Mandana Fasthb a ProQR Therapeutics, Leiden, The Netherlands b Waters Corporation, Milford MA, United States b Waters Corporation, Stockholm, Sweden Published on…
Klíčová slova
oligonucleotides, oligonucleotidespreparative, preparativepurification, purificationdevelopment, developmentlong, longmethod, methodoligonucleotide, oligonucleotidemaxpeak, maxpeakautopurification, autopurificationprep, prephps, hpscritical, criticalprivacy, privacycharged, chargedalkylamines
Improving the Purification Workflow With MaxPeak™ Premier OBD™ Preparative Columns: Isolation of Compounds From a Vitamin Beverage
2025|Waters|Aplikace
Application Note Improving the Purification Workflow With MaxPeak™ Premier OBD™ Preparative Columns: Isolation of Compounds From a Vitamin Beverage Jo-Ann M. Jablonski, Kathy Lawrence, Kim Haynes Waters Corporation Abstract Whether target compounds for isolation are well-characterized or impurities with unidentified…
Klíčová slova
vitamin, vitaminbeverage, beveragefrom, frompurification, purificationpreparative, preparativepremier, premiermaxpeak, maxpeakobd, obdcolumns, columnsuplc, uplcacquity, acquityisolating, isolatingwaters, watershps, hpstechnology
Improved purification of problematic compounds using Waters Maxpeak Premier OBD preparative columns with an integrated inert surface
2025|Waters|Postery
IMPROVED PURIFICATION OF PROBLEMATIC COMPOUNDS USING WATERS MAXPEAK PREMIER OBD PREPARATIVE COLUMNS WITH AN INTEGRATED INERT SURFACE Jo-Ann Jablonski, Kathy Lawrence, and Maggie Christian Waters Corporation, 34 Maple Street, Milford, MA 01757 INTRODUCTION Whether the goal is to obtain enough…
Klíčová slova
premier, premiermaxpeak, maxpeakobd, obdcolumns, columnsprep, preppreparative, preparativesurfaces, surfacesmetal, metalpurification, purificationcompounds, compoundsfraction, fractionparticle, particleadsorption, adsorptionisolating, isolatingnon
Optimizing IP-RP CRISPR sgRNA Purification Passes With High Efficiency Oligonucleotide Certified BEH 300 Å C18 5 μm Preparative Sorbent
2025|Waters|Aplikace
Application Note Optimizing IP-RP CRISPR sgRNA Purification Passes With High Efficiency Oligonucleotide Certified BEH 300 Å C18 5 µm Preparative Sorbent Amy Howie, Mandana Fasth, Chris Boggess, Matthew A. Lauber Oligo Factory, Waters Corporation Abstract CRISPR technology, which utilizes single-guide…
Klíčová slova
sgrna, sgrnapurification, purificationcrispr, crispracquity, acquitytunable, tunablerplc, rplcprivacy, privacygradients, gradientspremier, premierpalindromic, palindromicroom, roominterspaced, interspacedcaption, captionepigenetic, epigeneticdetectors
