Verification of the mycotoxin patulin from apple juice with isocratic HPLC

Význam tématu

Patulin je mykotoxin produkovaný plísněmi na poškozeném ovoci, zejména jablkách. Jeho termostabilita a toxicita vedou k nutnosti spolehlivé kontroly v potravinářském průmyslu. Evropské i americké úřady stanovily přísné limity pro maximální přípustnou denní dávku, proto je potřeba rychlých a citlivých analytických metod na hladiny v mikrogramových řádech.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, robustní a snadno validovatelnou isokratickou HPLC metodu pro stanovení patulinu v jablečném džusu s pracovní dobou kratší než 10 minut. Metoda by měla splňovat požadavky EU a FDA na detekční limity i kvantifikaci a zároveň zajišťovat dostatečné oddělení od interferencí matrice.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky jablečného džusu byly enzymaticky ošetřeny pektinázou, odstředěny a připraveny k analýze. Analýza probíhala na systému AZURA HPLC plus v isokratickém režimu.

• Eluent: 10 % acetonitril ve vodě
• Průtok: 1,0 mL/min
• Teplota kolony: 40 °C
• Teplota autosampleru: 4 °C
• Objem injekce: 50 µL
• Detekce: DAD při 275 nm, datový tok 10 Hz, časová konstanta 0,1 s
• Kolona: Eurospher II 100-5 Phenyl (150 × 4,6 mm)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila detekci patulinu v koncentraci až 0,003 µg/mL (LOQ) při signal-to-noise 10, s S/N > 200 pro 0,05 µg/mL. Oddělení od hlavních složek matrice (např. HMF) bylo dosaženo s rozlišením Rs > 1,5 během méně než 7 minut. Lineární kalibrační křivka v rozmezí 0,05–1,00 µg/mL prokázala vysokou přesnost a reprodukovatelnost výsledků.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje rychlý screening i přesné kvantitativní stanovení patulinu v džusech a jiných ovocných produktech. Díky krátkému času analýzy a nízkému vzorkovacímu objemu podporuje vysokou propustnost laboratoří v QA/QC sektoru. Chlazený autosampler prodlužuje stabilitu vzorků a termostatizace kolony zajišťuje robustnost při dlouhodobém provozu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další zlepšení citlivosti pomocí hmotnostních detektorů nebo dvojvlnkových detekčních systémů. Integrace s automatickým vzorkovačem a online extrakcí by mohla zkrátit přípravu. Metoda je rozšiřitelná i na další mykotoxiny v různých potravinářských matricích.

Závěr

Vyvinutá isokratická HPLC metoda s AZURA HPLC plus pro stanovení patulinu v jablečném džusu je rychlá, citlivá a splňuje legislativní limity EU a FDA. Detekční limit 0,003 µg/mL výrazně překračuje požadavky na maximální denní příjem, což umožňuje spolehlivou kontrolu kvality potravin.

Reference

1. 2003/598/EG, Evropská komise, Omezení koncentrace patulinu v jablečném džusu a dalších výrobcích, L203/54, 2003.
2. Llewellyn GC a kol., Immunological evaluation of the mycotoxin patulin in female B6C3F1 mice, Food Chem. Toxicol. 1998, 36, 1107–1111.
3. Puel O, Galtier P, Oswald IP, Biosynthesis and Toxicological Effects of Patulin, Toxins 2010, 2(4):613–631.