Determination of aflatoxins in peanut samples - from extraction to high efficient detection

Význam tématu

Detekce aflatoxinů v arašídech je klíčová pro ochranu zdraví spotřebitelů, neboť tyto mykotoxiny patří mezi nejtoxičtější a jsou klasifikovány jako karcinogenní látky. Kontrola jejich hladin ve výrobních a zpracovatelských řetězcích je nezbytná pro splnění legislativních limitů a prevenci zdravotních rizik.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem publikace je představit jednoduchý, robustní postup extrakce aflatoxinů z arašídů a popsat následnou vysoce citlivou analýzu pomocí HPLC s fluorescenční detekcí a fotochemickou postkolonní derivatizací. Studie demonstruje efektivitu metody na reálných vzorcích potravin.

Použitá metodika a instrumentace

Postup přípravy vzorku zahrnuje:

1. Mletí 50 g loupaných arašídů na jemný prášek.
2. Solid-liquid extrakci metanol–voda (17:3) po dobu 30 min s následnou filtrací.
3. Degreasing a liquid–liquid extrakci organickou fází (n-hexan, chloroform) pro odstranění lipidů.
4. Čištění roztoku pomocí SPE na křemelinových (SiOH) kartricích s odbouráním rušivých matricových složek.
5. Evaporaci eluátu na objem 3 mL a uchování v plynotěsné nádobě.
6. HPLC analýzu na C18 kolóně při 60 °C s proudem 2,4 mL/min a fluorescenční detekcí (Ex 365 nm, Em 460 nm).
7. Fotochemickou postkolonní derivatizaci UV zářením 254 nm pro zvýšení signálu aflatoxinů B1 a G1.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila efektivní odstranění matricových interferencí:

• Fluorescenční signály rušivých látek po prvním extrakčním kroku dosahovaly až 900 cps, po druhém kroku klesly pod 8 cps.
• REEČ čistota eluátu po SPE byla dostatečná pro spolehlivou analýzu.
• Limity detekce (LOD) stanovené na 0,05 ng/mL pro aflatoxiny B1/G1 a 0,015 ng/mL pro B2/G2 jsou výrazně nižší než požadavky EC.
• Kvantifikace prokázala vysokou opakovatelnost a robustnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Tato přijatelná a rychlá procedura je vhodná pro rutinní monitoring aflatoxinů v potravinách a krmivech. Výhody:

• Snížené nároky na toxické činidla díky UV derivatizaci.
• Vysoká citlivost a spolehlivost při kontrole legislativních limitů.
• Možnost aplikace na širší spektrum matrice (ořechy, obiloviny, sušené ovoce).

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry vývoje:

• Integrace rychlých technik mikroextrakce pro zkrácení doby přípravy.
• Automatizace SPE kroků a online čištění pro vyšší průtok vzorků.
• Využití pokročilých detekčních modulů (mass-spectrometry) pro širší profiling mykotoxinů.

Závěr

Popisovaná metoda spojuje účinnou přípravu vzorku se selektivní HPLC-FLD analýzou a fotochemickou derivatizací. Umožňuje rychlé, citlivé a reprodukovatelné stanovení aflatoxinů v potravinách a krmivech, splňující přísné regulační požadavky.

Použitá instrumentace

• Pumpa AZURA P6.1L, LPG
• Autosampler AZURA AS 6.1L
• Fluorescenční detektor RF-20A
• Termostat AZURA CT 2.1
• Kolona Eurospher II 100-3 C18, 150 × 4,6 mm
• Postkolonní derivatizátor UVE Box
• Interface IFU 2.1 LAN
• Software ClarityChrom 8.1

Reference

1. Hedayati et al. Microbiology, 153(6), 1677–1692 (2007).
2. Mupunga et al. J. Food Prot., 77(10), 1814–1818 (2014).
3. WHO Food Safety Digest, ref. WHO/NHM/FOS/RAM/18.1 (2018).
4. FDA CPG Sec. 683.100 (2019).
5. EC Regulation 401/2006 a 1881/2006 (2006–2016).
6. Folmert et al. KNAUER AppNote VFD0178 (2019).